何长青，王红霞，付 甜，黄芳芳，闫丽君，徐刚标

（1.中南林业科技大学 林木遗传育种实验室，湖南 长沙 410004；2.国家林业局 林产工业规划设计院，北京 100010）

观光木cpDNA非编码序列PCR反应体系优化及引物筛选

何长青1，王红霞2，付 甜1，黄芳芳1，闫丽君1，徐刚标1

（1.中南林业科技大学 林木遗传育种实验室，湖南 长沙 410004；2.国家林业局 林产工业规划设计院，北京 100010）

利用单因素与正交设计试验，对影响观光木cpDNA-PCR扩增的主要因子进行优化，建立了观光木cpDNA-PCR 最 适 反 应 体 系（20 μL)， 为：50 ng 模 板 DNA、1×PCR buffer、0.2 μmol·L-1引 物、2 mmol·L-1MgCl2、0.3 mmol·L-1dNTP以及1 UTaqDNA 聚合酶；筛选出了适合观光木分子谱系地理学研究的非编码区序列引物，为rpl32-trnL、psbJ-petA、3′rps16-5′trnK、atpI-atpH、petL-psbE。

观光木；cpDNA；非编码序列PCR；体系优化；引物筛选

观光木Tsoongiodendron odorum系木兰科常绿乔木，虫媒传粉[1]，为我国珍稀孑遗树种，属国家II级重点保护植物[2]，对被子植物系统发育以及系统分类方面具有重要的科学意义。在我国，观光木零散分布于长江流域以南海拔300～1 100 m 的山地常绿阔叶林中[3-4]，天然种群很小，为我国极小种群野生植物[5]。

观光木的研究主要集中在观光木的生物学特性、生态学特征、引种繁殖、化学成分和遗传多样性等方面[5-6]。分子谱系地理学是揭示种群遗传多样性、推测种群进化过程中的历史事件、探讨近缘物种亲缘关系的重要手段，已引起国内外学者的广泛重视。叶绿体DNA（Chrloroplast DNA，cpDNA）非编码序列具有较高的核苷酸置换率，能揭示种间和种内遗传变异，多态性丰富，能提供对系统发育研究的信息位点[7-8]。本研究通过对影响观光木cpDNA标记PCR反应体系主要因子进行优化，筛选出适宜的非编码区序列引物，为进一步开展濒危植物观光木分子谱系地理学研究奠定基础。……