常颖，张春水，高利生

（公安部物证鉴定中心，北京 100038）

甲卡西酮是一种合成的新型毒品［1-4］，近年来在我国的滥用日益猖獗。如何对缴获样品中的甲卡西酮进行定性定量分析，直接关系到对犯罪分子的定罪量刑，因而成为实战中迫切需要解决的问题。有关甲卡西酮的分析方法有液相色谱法［1］、气质联用法［5-6］等，但关于甲卡西酮液质联用方面的分析方法未见报道。出于实际办案的需要，笔者建立了甲卡西酮的LC-MS／MS定性定量分析方法。该方法与已报道的方法相比具有灵敏度高、分析时间短、流动相消耗少、线性范围良好等优点。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

三重串联四极杆液质联用仪(LC／QQQ)：Agilent 6460型，由Agilent1290系统和6460三重四级杆质谱系统组成，美国安捷伦公司；

乙腈：色谱纯，美国Fishier试剂公司；

甲酸：色谱纯，瑞士Fluka公司；

甲卡西酮标准品：1 mg／mL，作为标准储备溶液，美国Cerillent公司。

1.2 色谱条件

色 谱 柱：Agilent Zorbax®Eclipse Plus C18色 谱柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流动相A为0.1%甲酸溶液，B为乙腈，流速为0.3 mL／min，梯度洗脱程序见表1；进样量：3 μL。

表1 HPLC梯度洗脱程序

1.3 质谱条件

使用ESI离子源，正离子轰击模式；雾化气压力：172.4 kPa（25 psi）；干 燥 气 流 速：10 L／min；干燥气温度：350℃，ΔEMV为400 V；母离子、子离子、碰撞电压、碰撞能量见表2。甲卡西酮标样的MRM图谱及提取质谱图如图1所示。

表2 甲卡西酮的选择离子和优化参数

图1 甲卡西酮标样的MRM图谱及提取质谱图

1.4 定性定量方法

LC-MS／MS 定性准则参照国际兴奋剂检测标准WADA TD2003IDCR 文件［7］制订：(1)目标物与标准对照品保留时间误差在±2 %之内或±0.4 min之内；(2)目标物的两个母离子-子离子对峰面积的比率与标准对照品的两个母离子-子离子对峰面积的比率相对误差在±15 %之内。定性认定的前提是目标物与标准对照品的浓度相匹配，如果浓度过高出现超载，则应稀释后重新进样。

LC-MS／MS定量采用外标标准曲线法，采集模式选择多反应监测（MRM模式）。多反应监测可以进行两次离子选择，即通过MS1选择一定质量的母离子，与气体碰撞断裂后，再经过MS2选择一定质量的子离子，这样大大提高了分析的专一性和灵敏度。

2 结果与讨论

2.1 液相色谱条件选择

由于分析物是碱性化合物，因而选用正离子模式，流动相选用酸性物质，分析中使用0.1%的甲酸。比较甲醇和乙腈作为有机相，结果表明，乙腈的洗脱能力较强，峰形较好，因而选择乙腈。使用梯度洗脱是为了保证有较好的保留时间和峰形。

2.2 质谱条件选择

通过SCAN模式扫描，确定［M+H］+为164.2。

2.2.1 通过选择离子监测，优化毛细管出口电压

碰撞诱导解离是指通过与中性分子碰撞将能量传递给离子的过程。Fragmentor电压是毛细管出口的电压，决定母离子能否飞到四级杆，保证母离子的传输效率，因此是需要优化的重要参数之一。

在SIM模式下，选择了80，100，120，140四个碰撞电压，得到四个响应强度。响应强度最强的是80，继续优化，即选择75，80，85，90四个碰撞电压，最终选择响应最强的85作为最终优化结果。

2.2.2 通过子离子扫描，选择子离子，同时优化碰撞 能量（CE）

通过第一组四级杆做SIM，只允许164.2的离子通过，第二组四级杆做SCAN，得到响应最强的两个子离子，分别为131.1和77.2。同时优化这两个子离子的CE值，选择10，20，30，40四个CE值，最终131.1的子离子CE值为20，77.2的子离子CE值为50。

2.2.3 雾化气压力的优化

由于柱流速是0.3 mL／min，雾化气的参考压力为138～207 kPa(20～30 psi)，因此雾化气压力选择138，172，208 kPa (20，25，30 psi)分别优化，考查峰面积的响应值，最终选择的雾化气压力为172 kPa （25 psi）。

2.2.4 干燥气流速的优化

干燥气的参考流速是8～10 L／min，因此选择8，9，10 L／min分别优化，考察峰面积的响应值，最终选择的干燥气流速为10 L／min。

2.2.5 干燥气温度的优化

干燥气的参考温度是300～350℃，因此选择300，310，320，330，340，350℃ 6个温度点进行优化，考察峰面积的响应值，最终选择的干燥气温度为350℃。

2.3 标准曲线

利用卡西酮标准储备溶液依次稀释成质量浓度 分 别 为25 000，10 000，5 000，2 500，1 000，500，250，100，10，1，0.1 ng／mL的系列标准液。分 别取不同浓度的标准液3 μL进样，选择响应最强的transition(164.2→131.1)记录峰面积。每个浓度进样3次，并对3次峰面积的平均值A及质量浓度c(mg／mL)进行线性回归，得甲卡西酮的回归方程：A＝952.98c＋41 194，r2＝0.999 8，线性范围为0.1～10 000 ng／mL，检出限为0.04 ng／mL（S／N≥3）。

2.4 精密度试验

取浓度为500 ng／mL的甲卡西酮标准溶液，连续进样10针，样本的保留时间分别为2.224，2.212，2.201，2.205，2.212，2.206，2.205，2.2，2.195，2.219 min，峰 面 积 分 别 为18 966，21 784，21 519，21 663，21 802，21 765，22 108，22 415，27 816，计算样本的日内相对标准偏差；连续检测6天，样本的保留时间分 别为2.227，2.205，2.211，2.205，2.212，2.226 min，峰面积分别为21 802，21 663，21 519，21 732，21 784，18 966，计算样本的日间相对标准偏差，结果见表4。

2.5 准确度试验

采用加标回收方法，称取已知甲卡西酮含量的样品3份，分别加入低、中、高3个浓度的标准溶液，按上述方法测定，结果见表5。由表5可知，甲卡西酮回收率为95.6%～100.7%，说明方法的准确度较高。

表5 回收试验结果

2.6 样品测定

应用此方法对某市公安局送检的一样品进行分析，通过与甲卡西酮标准品进行比对，保留时间一致，2个母离子-子离子对的峰面积比例与标准品接近，定性确定其为甲卡西酮。使用外标标准曲线法定量计算浓度，最终确定甲卡西酮的含量为25.4%。该检测结果为对犯罪分子定罪量刑提供了依据。

3 结语

建立了甲卡西酮的LC-MS／MS定性定量分析方法，超高效液相色谱的快速分析和质谱的MRM 检测模式以及高分辨率，使该方法所得到的数据准确可靠，分析时间仅为7 min。与传统液相色谱相比，该法大大缩短了分析时间并且提高了分析灵敏度，为样品快速分析提供了可靠的分析平台。

［1］常颖，徐鹏，高利生.甲卡西酮的液相色谱法测定［J］.化学分析计量，2012，21(1): 67-69.

［2］Calkins R F，Aktan G B，Hussain K L. Methcathinone: the next illicit stimulant epidemic［J］. J Psychoactive Drugs, 1995，27(3): 277-285.

［3］Hyde J F，Browning E，Adams R (1928). Synthetic Homologs of d，l-Ephedrine［J］. Journal of the American Chemical Society，1928，50 (8): 2 287-2 292.

［4］Glennon R A，Yousif M，Naiman N，et al. Methcathinone: a new and potent amphetamine-like agent［J］. Pharmacol Biochem Behav，26 (3): 547-551.

［5］尚世杰，郭灵军.气相色谱-质谱法检测甲卡西酮及意义［J］.河南科技大学学报，2012，30(4): 274-276.

［6］常颖，张春水，高利生.甲卡西酮的气-质联用法分析1 例［J］.中国法医学杂志，2011，26(6): 500-501.

［7］WADA TD2003 IDCR 国际兴奋剂检测标准[EB／OL].[2013-2-10].http://www.wada-ama.org／en.