黄海燕，徐 静，胥艳芳，张丽燕，郝伟伟，邱文英，余 谦，向丕元

（四川省华派生物制药有限公司，四川 简阳 641400）

猪圆环病毒属圆环病毒科圆环病毒属，其无囊膜，为单股环状DNA病毒，是已知动物病毒中的最小病毒。该病毒对外界环境的抵抗力较强，在pH值为3的酸性环境中可长时间存活，其对氯仿不敏感，56℃或70℃处理一段时间不被灭活。病毒不凝集牛、羊、猪、鸡等多种动物和人的红细胞。

该病毒分为PCV1和PCV2两型，PCV1是从多株连续传代的PK-15细胞中发现的，是一种可以感染猪的常规病毒，其无致病性；PCV2是从病猪及一些无明显临床症状的隐性感染猪体内检测到的。感染PCV2后会引起断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎肾病综合征，与猪圆环病毒病与猪呼吸道疾病综合征、猪繁殖障碍、肉芽肿性肠炎、急性肺水肿、增生性坏死性肺炎等疾病的发生有一定关系。本病最早于1991年发现于加拿大，1997年首次分离到PCV2，我国最早于1999年通过血清学方法证实了此病的存在。

PCV2主要侵害猪的免疫系统，可导致猪发生免疫抑制甚至免疫缺陷。

1 猪圆环病毒病的临床类型

1.1 断奶仔猪多系统衰竭综合征 该综合征是由PCV2引起的，患病断奶仔猪以呼吸急促或困难，腹泻，贫血，有明显的淋巴组织病变和渐进性消瘦为特征。该综合征主要发生于哺乳期和保育期仔猪，尤其是6～18周龄仔猪最易感，其次为2～4月龄猪，其发病率一般在10%～20%（有时可达50%～60%），发病死亡率4%～20%。

患猪下痢、呼吸困难、眼睑水肿、生长发育受阻。病理变化为有不明显的淋巴结病变，出现间质性肺炎，胸腺和肝脏萎缩，肾脏浮肿，呈半透明状，脾脏呈肉色，胃有溃疡。

1.2 猪皮炎肾病综合征 该综合征是由PCV2引起的，以猪皮肤出现病变、淋巴结肿大和肾脏出血、肿大、坏死等为特征。该病主要侵害仔猪、育成猪和成年猪，尤其是10～16周龄猪最易感，其发病率低于10%，死亡率达50%。

病猪轻度发热，步态僵硬，后肢及会阴部皮肤出现红斑和丘疹，特征性症状为有坏死性脉管炎。脏器病变包括淋巴结肿大，皮质有点状坏死，肺脏、肠道和胃有出血点。

1.3 其他相关疾病 猪呼吸道疾病综合征主要是由PCV2、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体引起的，有时猪胸膜肺炎放线杆菌、猪多杀性巴氏杆菌和猪链球菌等也可引起发病。该病主要发生于4～6月龄猪，发病率一般为 30%～70%，死亡率为10%以下。

猪繁殖障碍主要发生于初产母猪或新引入的母猪。实验证实，猪胚中心是PCV2增殖的主要场所。对640头母猪进行PCV2疫苗免疫，统计免疫前后1年母猪的繁殖性能数据，结果表明母猪接种PCV2疫苗能显著提高母猪的繁殖性能。实验还采用ELISA和PCR方法检测免疫母猪所产仔猪血清中的PCV2抗体和核酸，结果显示免疫PCV2疫苗母猪所产仔猪的体内含有较高水平的母源抗体。

2 猪圆环病毒病的流行新特点

家猪和野猪是PCV2的自然宿主，PCV2各日龄的猪均易感，而猪科以外的动物对PCV2不易感。研究表明，用PCV2人工感染马、牛、羊、兔后，被感染动物不产生抗体，但病毒可在小鼠体内复制、传播，因此小鼠常作为PCV2研究的动物模型。

PCV2主要经口腔、呼吸道感染猪，病猪、带毒猪及患病公猪的精液等均是传染源，病猪的排泄物中含有大量的病毒。怀孕母猪感染PCV2后，病毒可通过胎盘垂直传播给仔猪，感染PCV2的公猪，病毒通过精液引起垂直传播。感染PCV2的猪发生免疫抑制，抵抗力下降。据报道，2006～2009年与 2002～2005年相比，9周龄及以下猪的PCV2发病率和死亡率显著下降，而10～12周龄和12周龄以上猪的发病率和死亡率显著上升。

对各地猪只的血清样品的检测结果表明，PCV2的抗体阳性率在65%以上，由此可见，PCV2感染已较严重。该病毒分为5个亚型（PCV2a-e），近年来，世界范围内流行的PCV2已从PCV2a亚型转化变PCV2b。

3 猪圆环病毒对免疫效果的影响

3.1 对猪瘟免疫的影响 检测结果显示，猪接种猪瘟疫苗前后感染PCV2会导致猪瘟特异性抗体水平低下、血清抗体阳转率下降、外周血淋巴细胞增殖活性降低。免疫前感染PCV2的猪在加强免疫猪瘟疫苗后，其抗体水平和血清抗体转阳率更低。

对已感染PCV2的试验猪进行猪瘟疫苗免疫后，在免疫第1、3、7、14、21、28 和 63 d 收集血清进行猪瘟特异性抗体和PCV2抗体检测，并采集淋巴结、内脏进行PCV2核酸和CSFV核酸检测，结果显示，几乎所有试验猪都未产生有效的猪瘟特异性抗体，在其内脏组织中也未检测到CSFV核酸，但在猪的淋巴结中检测到PCV2核酸。这表明PCV2会给猪的免疫系统造成严重损害，并抑制猪瘟抗体的产生。

3.2 对猪伪狂犬病免疫的影响采集只接种伪狂犬病疫苗和人工感染PCV2后3周接种伪狂犬病疫苗的试验猪的血清，对其PRVgB特异性抗体水平进行比较，结果表明，PCV2在一定程度上抑制了猪体对伪狂犬病疫苗的免疫应答，PCV2在感染后期抑制了机体特异性细胞免疫功能。

用Real-time PCR检测仔猪外周血单个核细胞（PBMC）体外单接种和共接种PCV2、猪伪狂犬病毒后的调节性细胞因子的mRNA表达水平，结果显示，PCV2能抑制猪伪狂犬病毒诱导的细胞因子mRNA表达上调，其中对IFN-γmRNA的抑制最为显著，由此推断PCV2会对猪伪狂犬病的细胞免疫反应产生不利影响。

3.3 对猪口蹄疫免疫的影响 采用阻断ELISA对只接种口蹄疫疫苗和人工感染PCV2后4周接种口蹄疫疫苗的猪血清进行口蹄疫抗体水平检测，对前腔静脉血进行CD4/CD8流式细胞术及血常规分析，结果表明，PCV2感染可在一定程度上抑制机体对猪口蹄疫疫苗的体液免疫应答，可导致淋巴细胞及白细胞数量降低，进而影响机体免疫功能。

4 疫苗的研究及效果

4.1 病毒载体疫苗 病毒载体疫苗是将PCV2基因组中编码Cap蛋白的片段克隆到不同的病毒载体中，通过培养病毒，快速、大量获得具备免疫原性的PCV2 Cap蛋白后，再将其制备成疫苗。

用昆虫杆状病毒作为病毒载体，对猪圆环病毒2型的ORF2进行表达，结果证实，该种重组蛋白具有良好的免疫活性，但昆虫细胞表达系统对营养、氧气等因子的要求较为苛刻，而为增加含氧量不停搅拌也会给细胞造成巨大压力，故该系统无法形成连续性表达。

4.2 嵌合病毒疫苗 将PCV2的Cap基因克隆入无致病性的PCV1基因骨架中可构建具有感染性的减毒嵌合病毒PCV1-2。为分析嵌合猪圆环病毒（PCV1-2）对仔猪的致病性和免疫原性，观察接种PCV1-2后的健康仔猪的临床症状及检测组织病毒含量及血清学变化，结果显示，接种PCV1-2后，猪体组织和血清中的病毒载量低，大体未出现明显的临床症状和病理变化。由此可见PCV1-2的致病性明显低于PCV2，接种仔猪快速产生了高水平的PCV2 ORF2抗体。PCV1-2具有优良的免疫原性，该重组病毒有望成为圆环病毒的候选株。

4.3 猪圆环病毒灭活疫苗 灭活疫苗是将PCV2野毒株或经标记改造的PCV2通过扩大培养、灭活剂灭活后，与佐剂按一定比例混合而成。

研究表明：PCV2灭活疫苗安全性高，免疫效果好，可刺激机体产生很强的体液免疫和细胞免疫，被免猪产生的抗体效价高，作用时间长。经产母猪或后备母猪免疫该疫苗后，仔猪可通过初乳获得保护。断奶仔猪接种灭活疫苗能诱导免疫应答，可有效抑制其他病菌引起的继发感染，并提高饲料报酬。

利用悬浮培养的PK-15细胞繁殖病毒，浓缩后β-内酰内酯（BPL）灭活，油佐剂乳化后接种仔猪和母猪，可获得良好的免疫效果。

用PCV2分离株接种PK15-B1克隆细胞制备抗原后，浓缩，经甲醛灭活，制成油佐剂疫苗，试验表明猪只应用该疫苗后可获得良好的免疫效果。据悉，某生物制药有限公司生产的PCV2强毒株灭活苗即将上市，试验结果表明其免疫效果良好。