杨晓军，苗文丽，裴 林△，于素静，郑惠军

(1.河北省中医药研究院，石家庄 050031;2.唐山市第四医院，河北唐山 063000;3.唐山市卫生监督所，河北唐山 063000)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以关节组织慢性炎症性病变为主要表现的自身免疫性疾病，是临床常见多发病，发病机理尚未完全明确，亦缺乏根治及预防本病的措施。近年来发现，免疫调节功能紊乱在RA的发病、病理改变中起主导作用，其中细胞因子的大量释放在介导AR炎症组织损伤中起关键作用［1］。本室从事风湿免疫性疾病研究多年，有着丰富的临床经验，在中医理论指导下，采用天星健骨方在控制活动期RA中发挥其独特的功效。本研究以细胞因子为切入点，通过天星健骨方对佐剂性关节炎大鼠血清IL-1、TNF-a影响的研究，以探讨中医药起效的主要作用机制。

1 材料与仪器

1.1 实验动物

SD清洁级雌性大鼠60只，体质量120±10 g，由河北医科大学实验动物中心提供(合格证编号DK0411-0005)。适应性饲养1周，自由饮食，12 h光亮/黑暗条件、23～26℃环境温度，单笼喂养。

1.2 药物

天星健骨方由雷公藤、制南星、土茯苓、青风藤、薏苡仁、骨碎补、补骨脂等组成，中药饮片由河北省中医药研究院饮片厂提供，由河北省中医药研究院制剂室制成浓缩胶囊。雷公藤多甙片为湖南株州制药厂产品(批号ZJ0010)。

1.3 试剂与仪器

弗氏完全佐剂(FCA)由Sigma公司提供;足趾容积测量仪YLS-TA购自山东省医学科学院设备站;大鼠IL-1、TNF-a试剂盒(上海朗卡生物技术有限公司);3550酶标仪(美国伯乐)。

2 方法

2.1 造模建立与分组

60只大鼠采用随机数字表法分成正常组10只，免疫造模组50只。对每只动物进行标记，用足容积测量仪准确测量，并记录大鼠左侧足爪容积(以下排水毫升数计)。造模方法［2］为将大鼠固定，在每只大鼠左足跖皮下注射弗氏完全佐剂(FCA)0.lml，正常对照组以同样方法同时注射等量生理盐水。然后每天观察药物反应，并测量局部肿胀情况。至造模第12天，将RA模型大鼠随机分为模型组、中药低量组、中药中量组、中药高量组、雷公藤多甙组，每组10只。

2.2 给药方法

于造模第12天开始，正常组、模型组灌服10 ml/kg生理盐水;中药低量组灌服0.4 g/kg、中药中量组灌服0.6 g/kg、中药中高量组灌服0.8 g/kg天星健骨方混悬液;雷公藤多甙组灌服2 mg/kg雷公藤多甙混悬液，每天1次，持续至28 d。常规喂养，自由进食饮水。

2.3 实验方法

在致炎前和致炎后分别测定大鼠左侧足爪容积，求出肿胀度(致炎后足爪容积一致炎前足爪容积)，以观察药物对AA大鼠继发性炎症的影响;双抗体夹心ELISA法检测IL-1、TNF-a，按试剂盒说明书要求进行操作。

2.4 统计学方法

应用SAS 6.12软件进行统计分析，各组检测结果以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用单因素方差分析。

3 结果

3.1 大鼠左后足爪容积的比较

表1显示，模型组50只大鼠左后足爪于致炎后第1天均开始出现明显肿胀，然后逐渐加重，第20天达到高峰，与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。中药高量组从致炎后16 d开始发挥疗效，在致炎后20 d中药中高量组足肿胀度与模型组比较均有下降(P＜0.01，P＜0.05)，且中药高量组作用优于雷公藤多甙组(P＜0.05)。

表1 各组大鼠足爪肿胀度比较(±s，n=10)

表1 各组大鼠足爪肿胀度比较(±s，n=10)

注:与模型组比较:*P ＜0.05，＊＊P＜0.01;与雷公藤多甙组比较:ΔP＜0.05，ΔΔP ＜0.01

组别肿胀度(ml)12 d 16 d 20 d 24 d 28 d正 常 组 0.270±0.032＊＊ 0.288±0.054＊＊ 0.315±0.017＊＊ 0.309±0.075＊＊ 0.310 ±0.022＊＊模 型 组 0.478±0.067 0.465±0.033 0.505±0.024 0.479±0.052 0.468±0.071中 药 低 量 组 0.462±0.026 0.445±0.047 0.448±0.037＊＊ 0.434±0.054* 0.417±0.018*中 药 中 量 组 0.485±0.016 0.457±0.034 0.424±0.038＊＊ 0.376±0.026＊＊ 0.382±0.051＊＊中 药 高 量 组 0.455±0.048 0.433±0.045 0.402±0.019＊＊Δ 0.343±0.042＊＊ΔΔ 0.325±0.027＊＊Δ雷 公 藤 多 甙 组 0.465±0.078 0.462±0.049 0.440±0.038＊＊ 0.392±0.010＊＊ 0.364±0.037＊＊

3.2 各组大鼠血清IL-1、TNF-a含量的比较

表2显示，各组与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.01)，说明各组血清IL-1和TNF-a显著增高。中药高量组指标比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，说明药物治疗在减少细胞因子的分泌上有一定的作用。

表2 各组大鼠血清IL-1、TNF-a含量比较(pg/ml，±s)

表2 各组大鼠血清IL-1、TNF-a含量比较(pg/ml，±s)

注:与模型组比较:*P＜0.05;与正常组比较:ΔP＜0.01

组别 鼠数IL-1 TNF-a正 常 组 10 91.24±15.32Δ 54.88±24.27Δ模 型 组 10 175.35±56.17 184.35±51.46中药低量组 10 169.82±63.62 165.42±50.12中药中量组 10 142.14±77.23 157.32±11.25中药高量组 10 125.28±42.48* 132.33±58.19*雷公藤多甙组 10 133.32±44.10 139.09±42.89*

4 讨论

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以关节组织慢性炎症性病变为主要表现的自身免疫性疾病。目前多数学者认为，免疫调节功能紊乱在RA的发病、病理改变中起主导作用，其中T淋巴细胞介导的细胞免疫功能失调有重要意义［3］。由于抑制性T细胞减少、活性降低，使TH/TS平衡失调，导致体液免疫过亢产生大量自身抗体，以及细胞因子的大量释放从而介导了AR炎症组织损伤［4］。细胞因子(cyotkine，CK)是由免疫细胞(如单核/巨噬细胞、T细胞、B细胞等)和某些非免疫细胞(如上皮细胞、成纤维细胞等)经刺激而合成、分泌的一类生物活性物质，在AR的发病中具有促炎、抑炎或刺激、抑制的正负反馈的免疫调控作用［5］。外周血中淋巴细胞中IL-1、TNF-a在RA发生中“中心”致炎细胞因子是AR发病的重要炎症介质［6，7］。IL-1和TNF-a在活动性RA中主要参与以下病理过程［8］:①通过刺激内皮细胞黏附分子的表达，促进白细胞汇集到关节腔;②可刺激结缔组织细胞和多形核细胞产生小分子炎性递质，如前列腺素等;③通过刺激滑膜细胞和软骨细胞破坏骨细胞，导致骨和软骨的破坏。

目前，临床上治疗主要针对症状的改善和延缓、控制病情进展，所用药物主要包括:非甾体抗炎药、慢作用抗风湿药、肾上腺皮质激素、生物制剂等。但病因至今未明，尚缺乏针对性治疗;或因现有的治疗药物毒副作用大，或因价格昂贵，患者不易接受或难以坚持长期服用。因此，从中医学的角度探讨其病因病机，寻求有效的治疗方法，对RA的控制有着重要的临床意义。RA属于中医痹病范畴，在长期的临床实践中，采用天星健骨方对本病的治疗积累了丰富的经验。有研究表明，雷公藤多苷(tripterygium glycosides，TG)具有免疫调节、抗炎止痛等作用［9，10］，本实验室采用其作为对照，研究天星健骨方组方上的优势。

本实验结果显示，造模12 d后，模型组与正常对照组足肿胀度比较差异有统计学意义(P＜0.01)，其各组大鼠血清IL-1、TNF-a含量显著增高(P＜0.01)，表明佐剂诱导了大鼠关节炎的发生。经治疗后中药高量组从致炎后16 d开始发挥疗效，在致炎后20 d中药中高量组足肿胀度与模型组比较均有下降(P＜0.01，P＜0.05)，且中药高量组作用优于雷公藤多甙组(P＜0.05)。与此同时，治疗组均能降低佐剂性关节炎大鼠血清中IL-1和TNF-a水平，中药高量组指标比较差异有统计学意义(P＜0.05)，说明对大鼠关节炎具有一定抑制作用，可通过降低大鼠血清中的IL-1、TNF-a含量，抑制滑膜细胞的增生，缓解炎性细胞的浸润，从而减轻关节滑膜的炎症。显示其对类风湿关节炎具有治疗作用，在缓解RA关节炎症方面疗效确切，且在疗效上较单味药雷公藤多苷有一定的优势。由于条件限制，本文只选择RA部分活动性细胞因子指标，但未能进行这些指标的相关性分析研究，这还有待于今后进一步的研究。

［1］叶任高，陆再英.内科学［M］.北京:人民卫生出版社，2004，2:585-591.

［2］张均田.现代药理实验方法［M］.北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998:1383.

［3］张进玉.类风湿关节炎［M］.2版.北京:人民卫生出版社，1995:20.

［4］Joseph A.Buekwalter，Thom RAA.Einhom，Sheldon R.Simon，陈启明，等译.骨科基础科学［M］.北京:人民卫生出版社，2001:987-1204.

［5］田龚非力.医学免疫学［M］.北京:科学出版社，2001:114-122.

［6］BrennanFM，Maini RN，Feldmann M.Role of pro-inflammatory cytokines inrheumatoid arthritis［J］. Springer Semin Immunopathol，1998，20:133-147.

［7］张晓，Lindon Llamado，Iris Pillay，等.白细胞介素-1基因多态性与类风湿关节炎病情活动及骨代谢的相关性［J］.中华风湿病学杂志，2001，5(2):87-90.

［8］蔡青，孟济明.IL一1和TNF与类风湿性关节炎［J］.上海免疫学杂志，1998，18(1):62-63.

［9］周静，赵宁，贾红伟，等.雷公藤多苷对大鼠胶原免疫性关节炎及佐剂性关节炎黏膜免疫功能影响的对比研究［J］.中国中西医结合杂志，2005，25(8):723-726.

［10］肖诚，周静，贾红伟，等.雷公藤多苷对大鼠胶原免疫性关节炎黏膜免疫的影响［J］.中国中医基础医学杂志，2005，11(7):483，499-500.