翟荣荣，蒋金凤，张济，丁永斌，王建华，魏继福

(1.南京医科大学第一附属医院药学部研究室，江苏 南京210029;2.中国科学院上海巴斯德研究所病毒免疫学实验室，上海200025;3.南京医科大学第一附属医院普外科，江苏南京210029)

肥大细胞是定位于组织的一类胞质内富含嗜碱性颗粒的细胞［1］，与哮喘、变态反应等疾病的发生密切相关。近年来，肥大细胞在调节机体免疫、防御病原微生物入侵等方面的作用正在引起人们的关注。目前主要采用HMC-1，一种从肥大细胞淋巴瘤(mast cell leukaemia)患者中分离转化的细胞系研究肥大细胞。HMC-1与机体生理条件下肥大细胞的差异，限制了对肥大细胞功能的深入研究。鉴于此，我们建立了两种人原代肥大细胞的体外诱导培养和分离方法，两法均可获得纯度较高、状态良好的肥大细胞，可适用于肥大细胞在免疫调节和病原防御中作用的后续研究。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 细胞和组织 健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)购于上海市血液中心;直肠和(或)结肠组织由南京医科大学第一附属医院普外科提供。患者签署知情同意书，并获得南京医科大学第一附属医院伦理委员会批准。

1.1.2 主要试剂和抗体 β-巯基乙醇和 RPMI 1640培养基(Gibco公司)，胶原蛋白水解酶Ⅰ型和甲苯胺蓝(Sigma公司)，透明质酸酶(Worthington公司)，脱氧核糖核酸酶(DNase)Ⅰ型(Roche公司)，Percoll分离液(GE公司)，抗CD34抗体包被的磁珠、抗CD117抗体包被的磁珠和MACS细胞分选缓冲液(Miltenyi公司)，重组人源干细胞因子(Stem cell factor，SCF)、IL-6 和 IL-3(R＆D 公司)，类胰蛋白酶抗体(Millipore公司)，荧光封片试剂(DAKO公司)，APC(Allophycocyanin)标记的……