韩尧辉，潘皓，毛俊倩，周艳芳，张赢予，王好，鲍永辉，赵龙，刘玲玲，张国辉

(江苏大学附属人民医院心内科，江苏镇江212002)

多柔比星(doxorubicin，DOX)是一种广谱抗肿瘤药物，长期应用可引起心脏毒性，进而引起不可逆转的心肌损伤和心功能障碍［1］。研究表明多柔比星引起的心脏毒性与心肌细胞的凋亡密切相关。S100B作为一种多功能钙敏感蛋白，在生理条件下，心肌细胞几乎不表达。有研究表明S100B可以直接引起心肌细胞凋亡［2］。本实验通过建立多柔比星损伤心肌细胞模型，研究S100B在心肌细胞损伤时的表达变化;通过RNA干扰技术沉默S100B基因，研究S100B在多柔比星诱导心肌细胞凋亡中的作用。

1 材料与方法

1.1 主要材料与试剂

1日龄新生SD大鼠，雌雄不限，由江苏大学实验动物中心提供。S100B siRNA:上游序列5'-CCGGGAACUAUUGAUAAGATT-3'，下游序列 5'-UCUUAUCAAUAGUUCCCGGTT-3';阴性对照siRNA:上游序列5'-UUCUUCGAACGUGUCACGUTT-3'，下游序列5'-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3'皆由上海吉玛公司合成。脂质体RNAi-MAX购自美国Invitrogen公司。盐酸多柔比星购自美国Enzo公司，DMEMF-12培养基、MTT均购自美国Gibco公司，胎牛血清购自美国Hyclone公司，胰蛋白酶购自美国Sigma公司，多聚赖氨酸、RIPA裂解液(强)、PMSF均购自碧云天生物科技公司，α-横纹肌肌动蛋白(αsarcomericactin，α-SA)、链霉素亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司，Annexin V-FITC/PI双染凋亡试剂盒购自南京厚载生物科技有限公司，S100B(D10G6)兔单克隆抗体购自美国Cell Signaling，单克隆β-肌动蛋白购自北京四正柏生物科技有限公司，山羊抗兔、抗小鼠IgG、免疫印迹高灵敏度化学发光检测试剂盒均购自北京康为世纪生物科技有限公司。……