黄燕，张赢予，王好，周艳芳，张国辉，芮涛

(江苏大学附属人民医院心内科，江苏镇江212002)

糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy，DCM)是糖尿病的常见并发症，其临床诊断是基于糖尿病患者独立于冠心病、高血压和乙醇性心肌病等出现心功能不全［1］。心肌纤维化是糖尿病心肌病发生发展过程中共同的、标志性的病理特征。心肌纤维化主要是心肌成纤维细胞合成细胞外基质蛋白增加，如Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)，Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)［2］。微小RNA(microRNA)是由18～24个核苷酸组成的非编码的小分子RNA，通过与靶mRNA的3'-UTR区域的互补配对结合而抑制靶mRNA的翻译或促进该mRNA的降解从而降低目标蛋白的表达，进而发挥其生物学功能［3］。以往研究表明，miR-375直接调节胰腺β细胞胰岛素的分泌，其表达与糖尿病的形成密切相关［4］。本研究旨在检测糖尿病状态下心肌成纤维细胞中miR-375的表达，同时探讨miR-375在糖尿病心肌纤维化中的可能作用机制。

1 材料和方法

1.1 动物和主要试剂

C57BL/6小鼠，2～4周龄，雌雄不限，由江苏大学动物实验中心提供。DMEM(高糖及低糖)购自美国Gibco公司;标准小牛血清购自美国Hyclone公司，胰酶购自美国Sigma公司;细胞RNA提取试剂盒，RNA反转录试剂盒，实时荧光定量 PCR试剂盒，小鼠 miR-375引物，RNU6B购自QIAGEN公司;小鼠miR375抑制剂(荧光素标记)购自上海吉玛制药技术有限公司;转染试剂，无血清培养基购自Invitrogen公司;免疫组化试剂盒购自北京厚德生物科技有限公司;波形蛋白(vimentin)一抗购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 原代心肌成纤维细胞的分离、培养及传代脱颈法处死C57BL/6小鼠，75%乙醇……