建立高分辨熔解曲线分析法检测SF3B1基因突变

2013-11-22杨静姚冬明钱军王翠竹杨小飞林江李云陈星星肖高飞马吉春

江苏大学学报(医学版) 2013年1期

杨静，姚冬明，钱军，王翠竹，杨小飞，林江，李云，陈星星，肖高飞，马吉春

(江苏大学附属人民医院1.血液科，2.中心实验室，江苏镇江212002)

RNA剪接是真核细胞基因表达中一个非常重要的生物过程，它通过选择性剪切在维持蛋白质的多样性方面起着重要的作用［1－2］。近年来研究发现，肿瘤中存在的RNA剪接的异常改变可引起多个基因突变的发生［2－3］。SF3B1蛋白是剪切因子3b蛋白复合物的一个亚单位，在RNA剪接过程中发挥着重要作用［4］。最新研究发现，6.5% ～28.1%的骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome，MDS)和5% ～15%的慢性淋巴细胞白血病患者中存在着SF3B1基因突变，其突变位点主要发生于密码子E622、H662、K666 和 K700［5－11］。高分辨熔解曲线分析(high-resolution melting analysis，HRMA)是一种灵敏度高、特异性好、可靠及快速的突变检测方法［12］。我们拟建立HRMA技术检测MDS患者的SF3B1基因突变。

1 对象和方法

1.1 病例

我院血液科初诊MDS患者30例，其中男18例，女12例;年龄 30～78岁，平均年龄58岁。MDS诊断按 WHO标准［13］，其中难治性贫血(refractory anemia，RA)9例、伴环形铁粒幼细胞的难治性贫血(RA with ringed sideroblasts，RARS)1例、伴多系病态造血的难治性血细胞减少症(refractory cytopenia with multilineage dysplasia，RCMD)18例、伴环形铁粒幼细胞的RCMD(RCMDRS)2例。本研究获得了江苏大学附属人民医院伦理委员会的批准。

1.2 主要试剂和仪器

Ficoll-Hypaque，上海试剂二厂;基因组DNA提取试剂盒，Gentra公司;PCR试剂，X-gal和 IPTG，TaKaRa公司;Taq DNA酶，MBI Fermentas公司;AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒，AxyPrep质粒提取试剂盒，PCR耗材，Axygen公司;T4 DNA连接酶，Promega公司;1×LCGreen Plus，Idaho公司;PCR引物和温度内标校准品片段序列由上海基康生物工程技术服务有限公司合成;ABI7300 PCR仪，美国ABI公司;凝胶成像仪，英国 Syngene公司;LightScanner分析仪，美国Idaho公司。