董 刚 乐 军 周 辉 项 东 杭州市中医院骨伤科 杭州310007

骨关节炎（osteoarthritis，OA）是一种最普遍的关节疾病，它所带来的疼痛、关节功能障碍，严重影响患者的生活质量，目前仍缺乏有效的治疗措施。基质金属蛋白酶（MMPs）因能降解几乎所有的软骨细胞外基质而被认为在OA 发病过程中起重要作用，是降解细胞外基质的主要酶系，而核因子-κB（NF-κB）则是介导OA 软骨中各种不利因素对MMPs 基因表达调控的最重要的转录因子。近年研究表明，吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）能够明显抑制实验模型中NF-κB的激活，阻断其下游靶基因的表达，发挥对组织器官良好的保护作用，展示了PDTC 机体应用的良好前景。本实验旨在观察PDTC 关节腔注射对兔创伤性OA 软骨组织MMP-1、MMP-9mRNA 表达及NF-κB 激活的影响，探讨PDTC 机体应用预防、延缓创伤性OA 进展的可行性。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 PDTC（美国Sigma 公司），Trizol 试剂（美国Invitrogen 公司）；逆转录酶Rtase，dNTP，RNA 酶抑制剂，Taq 酶，随机寡核苷酸引物（日本TaKaRa 公司）；PCR Marker（美国Fermentas 公司）；NF-κBp65 免疫组化试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）。

1.2 分组造模与处理 健康6月龄纯种新西兰大白兔20 只，由浙江中医药大学实验动物中心提供，雌雄各半，体质量2.4～2.8kg。3%戊巴比妥钠麻醉，两组行右膝横断前交叉韧带术（ACLT），并行抽屉实验确认，术后4天肌注青霉素40 万U/（kg·d）预防感染，术后1 周随机分为对照组和PDTC 组，各10 只。PDTC 组关节腔注射PDTC（1mg/mL），1 次2mg，每周2 次，连续8 周；对照组同一时间点关节腔注射等容量生理盐水。白兔不作固定，分笼饲养，术后1 周强迫白兔活动30min/d，持续2 周，末次用药3天后处死白兔。

1.3 观察指标 观察膝关节积液、滑膜肿胀情况，并于解剖显微镜（10 倍）下观察股骨内髁软骨退变情况，按以下标准评分：0 分，关节面光整，色泽如常；……