★ 肖移生 廖夫生 赵志冬 左爱仁 朱大诚

（江西中医学院 南昌 330004）

水蛭俗称蚂蝗，性咸、苦、平，归肝经，有破血、逐瘀、通经等功效，用于治癥瘕、痞块、血瘀闭经、跌打损伤等，其药理作用为抗凝、溶栓、抗血小板及降血脂等[1]；临床上水蛭也可单方或组方运用于肿瘤治疗中[2]。但现有的研究、应用水蛭治疗肿瘤是抗实体肿瘤，然而水蛭是否具有抗血液系统肿瘤的作用目前尚未见相关文献报道。因此，我们采用HL-60细胞作为髓系白血病研究的工具细胞，探讨水蛭提取物对其体外抑制作用。

1 材料与方法

1.1 细胞株及培养方法

HL60细胞由江西中医学院基础医学院实验中心保存，将HL60细胞培养于含有10%新生小牛血清的RPMI1640完全培养基中（37℃，5%CO2饱和湿度培养），培养至细胞处于对数生长期用于后续实验。

1.2 主要试剂

RPMI1640培养基及新生小牛血清为美国GIB-CO公司产品，四甲基偶氮唑盐（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）为美国Sigma公司产品。

1.3 药物

水蛭原药材购于江西中医学院附属医院中药房，并经我校中药生药教研室鉴定且符合国家中药临床应用标准。水蛭用超微粉碎机粉碎，提取物以液氮快速冻融法制备[3]：取水蛭超微粉1.5g置15mL离心管内，加10mL无菌双蒸水制成混悬液，再将离心管置液氮内5min，取出，立即放入37℃水浴中迅速融解，重复3次，再3 000 r/min离心10min。取上清液过滤，滤液冷冻干燥18h即得水蛭冻干粉，-20℃保存备用，临用前用培养基配成实验所需浓度工作液，再经0.22μm无菌滤器正压过滤除菌。

1.4 HL60细胞生长曲线绘制

取对数生长期的细胞接种于25mL的培养瓶，接种浓度为1.0×105/mL，每瓶培养液为4mL，根据预试验结果，实验组加入0.05、0.1、0.5、1.0mg/mL浓度的水蛭提取物连续处理，对照组不加药；……