牛忠杰，畅继武

（天津医科大学第二医院泌尿外科，天津市泌尿外科研究所，天津 300211）

精原细胞瘤是睾丸最常见的恶性肿瘤，肿瘤间质中伴有较多淋巴细胞浸润。笔者采用免疫组织化学方法对72例精原细胞瘤间质中浸润的淋巴细胞CD3、CD4、CD8、CD25 的表达情况进行检测，研究肿瘤中细胞免疫情况。

1 资料和方法

1.1 临床资料 72例患者均为1988-2012年于本院住院行手术治疗的患者，均经病理证实为精原细胞瘤，所有患者术前均未接受放疗、化疗及免疫治疗。经典型精原细胞瘤51例，临床I 期38例，II 期13例；间变型精原细胞瘤21例，临床I 期13例，II期8例；患者平均年龄24～67 岁，中位年龄43 岁。病变的睾丸左侧30例，右侧42例。

1.2 方法

1.2.1 切片 肿瘤组织常规石蜡包埋后，每个标本连续切取4μm 厚白片4 张，分别进行CD3、CD8、CD4 及CD25 染色。

1.2.2 主要试剂 鼠抗人CD3 单克隆抗体，兔抗人CD4 单克隆抗体，兔抗人CD8 单克隆抗体，鼠抗人CD25 单克隆抗体及通用型PV6000 HRP 多聚体二抗均购自中杉金桥公司。

1.2.3 免疫组织化学染色步骤 应用免疫组织化学SP 法染色。石蜡切片常规脱蜡和水化后,使用微波炉修复，恢复室温后用PBS 洗涤；使用3%H2O2封闭内源性过氧化物酶；PBS 洗涤；滴加一抗，放入4℃冰箱孵育过夜；PBS 洗涤；滴加二抗试剂，室温下孵育20 min；PBS 洗涤；DAB 显色，显微镜下观察并终止显色；自来水冲洗；苏木素复染；梯度乙醇脱水；二甲苯透明及中性树胶封片。

1.3 结果判读 CD3+、CD4+、CD8+、CD25+T 细胞判断标准：细胞形态完整，结构清晰，细胞膜上有棕黄色颗粒附着,如图1～4。连续切片中，在相同部位出现CD4、CD25 阳性标记的细胞即为调节性T 细胞（T regulatory，Treg）。……