张秀梅，顾金松，刘 曙，孙成福

谭 进，石 明，苏建军 (兴化市人民医院病理科，江苏 兴化 225700)

肝细胞癌中MACC1基因的表达及其临床意义

张秀梅，顾金松，刘 曙，孙成福

谭 进，石 明，苏建军 (兴化市人民医院病理科，江苏 兴化 225700)

目的：探讨肠癌转移相关基因l(metastasis-associated in colon cancer-1，MACC1)在肝细胞癌组织中的表达及临床意义。方法： 采用RT-PCR技术检测MACC1在肝癌组织及对应癌旁组织中表达情况，并分析MACC1基因的表达与肝细胞癌临床病理分级的关系。结果： MACC1 mRNA水平在肝癌组织的表达水平显著高于癌旁肝组织(P<0.05)，在癌旁肝组织的表达水平显著高于正常肝组织(P<0.05)；MACC1 mRNA的表达水平与肝癌组织Edmondson病理分级显著相关(P<0.05)， MACC1 mRNA的表达水平与癌旁组织Edmondson病理分级无显著相关性(P>0.05)。结论：MACC1在肝细胞癌组织中的表达较对应癌旁组织明显升高，并且与肿瘤细胞的分化程度明显相关，提示MACC1可作为肝细胞癌潜诊断因子。

MACC1；肝细胞癌；病理

原发性肝癌是一种原发灶发生于肝细胞和肝内胆管上皮细胞的恶性肿瘤，其中肝细胞性肝癌(HCC)是最主要的病理类型，占原发性肝癌90%以上[1]。MACC1基因是2009年由Stein等发现并命名的一个新基因。Stein等研究发现，MACC1作为肝细胞生长因子(HGF)/c-met信号通路的一个关键调节因子在结肠癌的侵袭和转移中发挥着重要作用[2]，此外，刘清泉等发现MACC1基因可能在肝细胞癌的侵袭转移中发挥着重要作用，有可能成为肝癌治疗的新靶点之一[3]。为了进一步研究MACC1在肝细胞癌及对应癌旁组织中的表达，分析其在肝细胞癌及对应癌旁组织中的表达水平及其与临床病理分级中的联系，本研究对我院救治的肝癌患者的病理组织中MACC1mRNA的表达水平进行检测。现报道如下。

1 对象与方法

1.1对象

选取我院2011年3月至2013年3月期间肝细胞癌(HCC)的手术切除标本，共40例，手术切除癌组织及相对应的癌旁肝组织；选取同时期正常肝组织标本18例作为对照组(4例为肝内胆管结石患者行部分肝脏切除术、12例为肝血管瘤行血管瘤切除术、2例为肝破裂行部分肝脏切除术)。所有患者术前均未行放射、化疗及射频消融治疗，所有组织标本经术后病理学证实为肝细胞癌。病例组中男性22例，女性18例，年龄51～60岁，平均年龄(54.42±3.78)岁。所有病例术前都未进行放化疗和射频消融等治疗。所有组织标本切下后迅速放入液氮，后移至-80℃冰箱冻存。HCC组织根据Edmondson标准分级[4]：Ⅰ级12例，Ⅱ级13例，Ⅲ级11例，Ⅳ级4例。

1.2方法

1.2.1 主要试剂 RNA提取试剂盒Trizol购于Gibco公司；逆转录试剂盒购于Femantes公司；DNA Marker、PCR试剂盒、焦碳酸二乙脂(DEPC)均购于生兴生化科技(南京)有限公司。

1.2.2 RNA提取及逆转录反应 取约100mg组织，加入1ml Trizol，充分匀浆，抽提总RNA，所得RNA溶于20μl DEPC处理水。提取的总RNA经紫外分光光度计进行定量及检测纯度。按逆转录试剂盒说明书进行操作，产物-20℃保存备用。

PCR反应条件：94℃变性5min后扩增30个循环，循环参数为：94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，最后72℃延伸7min。

RT-PCR引物由英潍捷基公司合成，MACC1基因的上游引物F：5-CTTGCGGAGGTCACCATAGC，R：5-GATTTCCAACAACGGGCTCA，内参GAPDH 引物F：5-GGTAAAGGTCGGTGTGAACG，R：5-ACCATGTAGTTGAGGTCAATGAAGG。

1.3统计学分析

数据采用SPSS17.0软件进行统计分析，计量资料组间比较采用t检验，相关分析采用spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1正常肝组织、肝癌组织及对应癌旁组织中MACC1mRNA的表达水平

图1 正常肝组织、肝癌及对应癌旁组织中MACC1mRNA的表达统计

与正常肝组织(1.03±0.12)比较，MACC1在癌旁组织中mRNA表达水平(5.12±0.99)显著增高，差异有统计学意义(P<0.05)；与癌旁组织比较，MACC1在肝癌组织中mRNA的表达水平(12.88±1.32)显著增高，差异有统计学意义(P<0.05)，以上结果提示MACC1在肝细胞癌组织与癌旁组织中均高表达，且在肝细胞癌中表达更高。见图1。

2.2MACC1表达水平与在肝癌组织病理分级的相关性

MACC1 mRNA表达水平与HCC分化程度显著相关(P<0.05)，说明HCC分化愈差,MACC1表达愈弱。而MACC1mRNA表达水平与癌旁组织分化程度无显著相关(P>0.05)。见表1。

表1 CKS1蛋白表达强度与HCC分化程度的关系

注：与HCC分化程度比较，▲r=0.710，P<0.05；◆r=0.221，P>0.05。

3 讨 论

肝细胞癌是我国常见恶性肿瘤之一，其特点主要为起病隐匿，生长快速，预后差，给患者造成巨大的损害。近年来HCC发病率和死亡率有逐年升高的趋势，目前HCC首选的、疗效最确切的治疗方法为手术切除，然而临床发现手术治疗的总体治疗效果仍不能令人满意[4]。研究认为肿瘤瘤体的大小、数目虽然是影响患者预后的重要因素，但根本因素是肿瘤的生物学特征[5]。

MACC1基因定位于人染色体7p15.3，结构包含7个外显子和6个内含子，其cDNA含有2559个核苷酸序列，编码的结合蛋白包含852个氨基酸。以往的研究认为MACCI作为一个关键调节因子在结肠癌的侵袭中发挥着重要作用[2]，且有发现MACC1基因可能在肝细胞癌的侵袭转移中亦发挥着重要作用[3]。本研究通过对40例肝癌组织、癌旁肝组织以及18例非肝癌的正常肝组织中MACC1 mRNA的表达情况进行了检测，探讨其在肝细胞癌及其癌旁组织中的诊治意义。结果显示，MACC1 mRNA水平在肝癌组织的表达水平显著高于正常肝组织，且肝癌组织中MACC1 mRNA水平显著高于癌旁组织。这就说明MACC1的表达水平可能与肝癌的增殖能力和恶性程度有着密切的联系，提示了MACC1在肝癌的发生发展中可能起着重要的协同作用，这与Gao等报道的结果相一致[6]。为了进一步验证上述结果，我们将MACC1的表达水平与肝癌组织及癌旁组织的病理分级进行相关性分析，结果发现MACC1 mRNA表达水平与与HCC分化程度显著相关，而MACC1 mRNA表达水平与与癌旁组织分化程度无显著相关，这与Kawamura研究认为的MACC1可作为癌症的预示因子的结果相一致[7]。然而，本研究存在着不足之处，如本研究没有检测MACCl在肝癌及癌旁组织中的蛋白水平的表达以及其与HCC分化的联系，有待进一步的验证。

综上所述，MACCl在肝细胞癌的发生、发展中起着重要的作用，检测肝癌组织中的MACCl表达水平对患者诊断和临床个体化治疗具有一定的指导意义。

[1]杨秉辉，夏景林，黄力文，等.我国肝癌“临床相”30年的变迁-原发性肝癌3250例的对比研究[J].中华医学杂志，2003，83(12)：1053-1057.

[2]Stein U，Wralther W，Arlt F，et a1.MACCl，a newly identified key regulator ofHGF-MET signaling，predicts colon cRncer metastasis[J].Nat Med，2009，15(1)：59-67.

[3]刘清泉,刘青光,昝献峰,等.MACC1基因在肝细胞癌中的表达及临床意义[J]. 华中科技大学学报：医学版，2010，39(1): 22-24.

[4]Bruix J，Sherman M.Management of hepatocellular carcinoma[J].Hepatology，2005,42(5):1208-1236.

[5]Inoue K，Hasegawa K，Ishizawa Z，et al.Is there any difference in survival according to the portal tumor thrombectomy method in patients with hepatocellular carcinoma[J].Surgery，2009,145(1):9-19.

[6]Gao J，Ding F，Liu Q， et al.Knockdown of MACC1 expression suppressed hepatocellular carcinoma cell migration and invasion and inhibited expression of MMP2 and MMP9[J]. Mol Cell Biochem，2013，376(1/2):21-32.

[7]Kawamura M，Saigusa S，Toiyama Y,et al. Correlation of MACC1 and MET expression in rectal cancer after neoadjuvant chemoradiotherapy[J]. Anticancer Res，2012 ，32(4):1527-1531.

2013-05-29

张秀梅(1974-)，女，主治医师，主要从事临床病理学的诊断及研究工作。

R730.2

A

1673-1409(2013)27-0010-03

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