汪福东，郭义娟，董立新，王志文

（1.河北省玉田县医院内六科，河北 玉田064199；2.河北联合大学中医学院，河北 唐山063000）

抗骨增生片为纯中药制剂，收载于《卫生部药品标准》中，用于治疗骨关节炎有较好的疗效。其中的组成药物被证实有缓解关节炎关节疼痛、消除关节肿胀、恢复关节功能等作用。我们通过建立兔膝骨关节炎模型，观察抗骨增生片对兔膝骨关节炎（KOA）软骨组织病理形态的影响，以探讨其治疗膝骨关节炎的作用机理，总结如下。

1 实验材料

药物：抗骨增生片（国药准字Z22023683，批号050905。通化华夏药业有限责任公司生产），成分为熟地、鹿衔草、骨碎补（烫）、淫羊藿、肉苁蓉、鸡血藤、莱菔子（炒）。

动物：日本大耳白兔30只，体质量（2.50±0.15）kg。于室温分笼饲养，按顿供给标准饲料（由河北联合大学医学院实验动物中心提供），自由饮水。

试剂及仪器：木瓜蛋白酶（活力200万U，天津诺奥科技发展有限公司提供）。电子天平（上海友声衡器有限公司生产），SHH.W21.600三用电热恒温水浴箱（北京市长安科学仪器厂生产），光学显微镜BX50型（日本OLYMPUS公司生产）。

2 实验方法

动物分组：日本大耳白兔30只，适应性喂养1周后，分别按体质量由小到大编号，据随机数字表分为A（正常组）、B（模型组）、C（抗骨增生片组），每组各10只。

模型建立：按日本鬼头康彦等［1］的兔膝关节腔内注入木瓜蛋白酶造成骨关节炎病变模型方法，用电子天平称取1.6g200万U木瓜蛋白酶，量杯中倒入50mL生理盐水，将1.6g木瓜蛋白酶加入，待其完全溶解后加入生理盐水共成100mL，即配制成1.6%木瓜蛋白酶生理盐水溶液。将兔用氯胺酮（10mg/kg体质量，肌内注射）麻醉后，右后腿膝关节周围剪毛，然后用碘伏消毒皮肤，轻弯曲膝关节，经髌腱两侧进针，将1.6%木瓜蛋白酶生理盐水溶液0.5mL注入兔膝关节腔，每隔3天注射1次，共注射3次。B、C两组均用此种方法造模。期间动物用标准饲料正常饲养。

给药：于第3次造模结束后第2天开始给药。C组每日1次，抗骨增生片按成人每日每公斤体质量用药量的6倍作为兔每日每公斤体质量的等效剂量 ，将药溶于10mL生理盐水中灌胃，A、B两组灌入等量生理盐水，各组灌胃4周。期间常规饲养，正常饮水。

标本采集及处理：于给药4周后即造模后第38天，各组分别处死实验兔10只，打开同侧（右后腿）膝关节腔，取下右膝关节面胫骨平台，标本立即用新鲜配制的4%多聚甲醛/0.1MPBS，含有1/1000DEPC固定液固定。10%EDTA（用1/1000DEPC配制）脱钙10天，石蜡包埋后切片，切片部位取胫骨平台标本前外象限的1/2的交界处。每个标本制作两张切片，进行苏木素和伊红染色光镜观察，做病理形态学分析（参照C.Colombo［3］的关节软骨病理标准制定积分统计表）。见表1。

表1 关节软骨病理评估参数标准

3 实验结果

A组可见关节软骨4层结构（由外向内分别为表层、移行层、辐射层、钙化层）清晰可辨，软骨细胞无减少，排列整齐，潮线结构完整。B组关节软骨结构破坏，表面出现明显裂纹及广泛脆裂，表层缺损明显，可见广泛性溃疡面、软骨细胞缺失、软骨下骨暴露，软骨细胞成簇明显。C组关节软骨结构较完整，表面有小裂纹及轻度脆裂，表层缺损轻微，溃疡面较局限，软骨细胞缺失、软骨下骨暴露不明显，可见小的软骨细胞成簇。C组与B组各项病理积分比较均有显著性差异（P＜0.01）。结果见表2~4。

表2 软骨表层病理积分比较 （分，±s）

表2 软骨表层病理积分比较 （分，±s）

注：与B组比较，△P<0.01。

组别 动物数 表层缺损 糜烂或溃烂 表面脆裂A组 10 -- -- --B 组 10 3.6±0.52 3.4±0.69 3.3±0.94 C组 10 2.1±0.57△ 1.6±0.70△ 1.6±0.70△

表3 软骨深层病理积分比较 （分，±s）

表3 软骨深层病理积分比较 （分，±s）

注：与B组比较，△P<0.01。

组别 动物数 裂纹 软骨下骨暴露A组 10 -- --B 组 10 3.8±0.42 3.5±0.53 C组 10 1.8±0.63△ 1.5±0.53△

表4 软骨细胞病理积分比较 （分，±s）

表4 软骨细胞病理积分比较 （分，±s）

注：与B组比较，△P＜0.01。

组别 动物数 裂纹 软骨下骨暴露A组 10 -- --B 组 10 3.6±0.52 3.4±0.52 C组 10 1.6±0.52△ 1.6±0.52△

表层缺损、糜烂或溃烂、表面脆裂、裂纹、软骨下骨暴露、细胞成簇、软骨细胞缺失各项病理总积分，C组与B组比较有显著性差异（P＜0.01）。A组为正常组，故表中不做积分比较。结果见表5。

表5 病理总积分比较 （分，±s）

表5 病理总积分比较 （分，±s）

注：与B组比较，△P＜0.01。

组别 动物数 病理总积分A组 10 --B组 10 24.6±3.47 C 组 10 11.8±3.05△

4 讨 论

骨关节炎（osteoarthritis，OA）是常见于老年人的关节退行性疾病，其特征为关节软骨的侵蚀，边缘骨增生（如形成骨赘），软骨下硬化，以及滑膜和关节腔生化和形态学改变。晚期的病理改变包括软化、溃疡以及关节软骨的局部侵蚀，也可伴有滑膜炎症［4］。膝关节是最常受累的关节，膝关节损伤早期表现为活动时出现的膝关节疼痛，继而关节肿大。发生在膝关节的骨关节炎为膝关节骨性关节炎（knee osteoarthritis，KOA），从膝关节软骨退行性改变开始逐渐累及软骨下骨质、滑膜、关节囊等关节重要结构，以局限性、进行性关节软骨破坏及关节边缘的骨赘形成为其主要病理形态学的改变。其特征可以概括为关节软骨完整性破坏，软骨下骨板的病变，关节边缘骨质增生，滑膜慢性炎症［5］。我们在实验中，可能是观察的时间尚短，未见有关节边缘的骨赘（骨质增生）形成。

骨关节炎属中医“痹证”范畴，抗骨增生片有补肾、活血、止痛之效，可使肾强而骨壮、活血而瘀除。组方药简而力专，恰合骨痹寒、瘀、虚病机。

实验结果显示，木瓜蛋白酶关节腔注射造模后软骨表层、软骨深层、软骨细胞，均出现了病理性损坏，与前面提到的骨关节炎患者出现的病理特征相似。同时，我们在取材时发现造模处胫骨周围软组织有充血现象，关节囊肥厚，印证了“痹有瘀血”的论点，而抗骨增生片有活血化瘀之功，可使充血和肥厚减轻。病理观察中发现，用抗骨增生片后软骨细胞缺失积分明显减少，损害得到改善。模型组软骨表现为明显的表面缺损、表面糜烂或溃烂、表面脆裂、形成裂纹、软骨下骨暴露，完整的关节面消失。而用抗骨增生片后这些病理积分明显减少。

抗骨增生片对兔实验性膝骨关节炎软骨损害具有修复作用。由此可以认为，抗骨增生片治疗膝关节骨性关节炎可通过修复软骨损害而发挥治疗作用。

［1］Kitoh Y，Katsuvamaki T，Tanaka H，et al，Effect of SL-1010（Sodiumhyaluronate with moleculer weight）in experimental osteoarthritis induced by intro-articularly，applied papain in rabbits［J］.Folia pharmackl Japon，1992，100：67.

［2］孙敬方.动物实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：357.

［3］Colombo C，Butler M，O’Byrne E et al. A new model of osteoarthritis in rabbits I：Development of knee joint pathology following lateral meniscectomy and section of the fibular collateral and sesamoid ligaments［J］.Arthritis Rheum，1983，26（7）：875-885.

［4］左晓霞，陶立坚，高洁生主译.凯利风湿病学［M］.7版.北京：人民卫生出版社，2006：1276.

［5］侯德才，刘元禄，邰东旭，等.骨性关节炎的病因与机制研究进展［J］.中医正骨，2006，7（18）：73.