侯小霞 刘俊晓 王孟丽

胎盘FATP1和HFABP基因的表达水平与胎儿生长发育的相关性研究

侯小霞 刘俊晓 王孟丽

目的 探讨必需脂肪酸转运蛋白水平与胎儿生长发育的相关性。方法 采用实时定量PCR(RT-PCR)检测胎盘中FATP1和HFABP mRNA 表达水平, 同时收集新生儿的身长、体重、头围和胎龄等指标。结果 胎盘中FATP1 和HFABP mRNA的水平, 男性和女性之间有显著差异；FATP1 mRNA的水平与新生儿的身长相关, HFABP与胎龄表现出相关性。结论 胎盘中FATP1和HFABP的表达与胎儿的发育关系密切。

胎盘；FATP1；HFABP；生长发育

胎盘能调节母体与胎儿之间营养物质和外源性化学物质的转运。必需脂肪酸及其衍生物是通过胎盘来调节的重要物质, 也是生物膜必不可少的组成成分和胞内外信号分子的前体。哺乳动物不能合成必需脂肪酸, 因此, 胎儿依赖母体日常摄入的必需脂肪酸及其在胎盘中的定向运输来获取足够的数量, 以维持正常发育［1］。胎盘中必需脂肪酸转运蛋白FATP1及HFABP的表达水平反应了胎儿能通过胎盘获得的必需脂肪酸的数量。本实验以新生儿为研究对象, 在出生时采集胎盘组织, 检测胎盘中必需脂肪酸转运蛋白FATP1及HFABP的mRNA表达水平, 从而探讨胎儿生长发育与新生儿胎盘必需脂肪酸转运蛋白水平的相关性。

1 材料与方法

1.1 一般资料 本研究中, 男性新生儿69名, 女性新生儿52名, 均在同一地区医院出生。在取得父母同意后, 在新生儿出生时进行样本采集和数据收集。

1.2 胎盘的采集和蛋白水平的检测 以脐带附着处为中心将胎盘分成两份, 在脐带周围剪一小块全厚度的组织, 立即放入冻存管中, 标记姓名和编号, -70 ℃低温冰箱保存。采用实时定量PCR(RT-PCR)检测胎盘中FATP1和HFABP mRNA 表达水平。主要试剂：RNA 酶抑制剂(广州瑞真生物有限公司)；逆转录PCR试剂盒(PrimeScript RT reagent Kit Perfect Real Time, Takara, 日本)；荧光定量PCR试剂盒(SYBR Premix Ex TaqTM(Tli RNaseH Plus), Takara, 日 本 )；2×Taq PCR Master Mix(北京诺维森生物科技有限公司)。

胎盘组织RNA提取：取100 mg胎盘组织置于匀浆器中,充分研磨, 加入1000 μl Trizol, 转移至EP管中, 反复吹打至组织完全分散, 加入氯仿200 μl, 颠倒混匀, 27 ℃ 放置 5 min,4 ℃12000 rmp离心15 min, 将上层水相转移于另一EP管中,加入等体积异丙醇混匀放置 15 min, 4 ℃12000 rmp离心10 min, 弃上清, 加预冷的75%乙醇, 4 ℃7500 rmp离心 5min,弃上清, 加入30 μl DEPC水。

逆转录cDNA的反应条件：37℃,15 min(反转录反应)；85℃,5 sec(反转录酶的失活反应)。将cDNA用DEPC水稀释5倍, 备用。实时定量PCR的扩增标准程序：95 ℃, 30 s；95 ℃ , 5 s; 60 ℃ , 31 s (重复 40个循环 )。

1.3 新生儿体格发育指标的收集 新生儿出生后, 进行身长(cm)、体重(kg)、头围(cm)和胎龄(周)的检测, 收集数据。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行统计分析, 偏正态分布用中位数表示, 均数比较用非参数检验(K-S、M-W检验), 相关因素分析使用Spearman等级相关分析, 以α=0.05作为检验标准。

2 结果

胎盘中FATP1 和 HFABP mRNA的水平, 经统计分析结果显示, 男性新生儿胎盘中FATP1 和 HFABP mRNA的表达水平高于女性, 差异有统计学意义(均P＜0.01)。随着FATP1 mRNA表达水平的升高, HFABP的表达水平也显著增加(Rs=0.51, P＜0.001)；FATP1与新生儿的身长相关, HFABP与胎龄表现出相关性。

表1 胎盘中FATP1及HFABP的表达水平与新生儿出生相关指标的相关分析

3 讨论

本研究发现, 胎盘中FATP1, HFABP的表达水平在男性和女性新生儿中的表现出明显的差异(P＜0.01), 表现为FATP1, HFABP在男性新生儿胎盘中的表达水平高于女性。由此我们推测, FATP1, HFABP在男婴和女婴之间的生长发育上存在较大的机制差别。以前的研究中, 脂肪酸转运蛋白表达的上调, 会导致各种类型的脂肪酸和脂质在胎盘中积累, 可能会引起胎盘代谢活动和脂质活动增强, 从而降低胎儿必需脂肪酸的供给。胎儿脂肪酸供应不足会导致胎儿宫内发育迟缓, 胎儿面部畸形, 死胎, 严重的产后发育迟缓,并可能与成人时期一些疾病风险增加有关。胎盘中FATP1和HFABP的表达水平之间具有较强的相关性(P＜0.001), 胎盘中FATP1的表达水平与新生儿身长有较强的相关性, 胎盘中HFABP的表达水平与新生儿胎龄有较强的相关性。说明胎盘中FATP1和HFABP的表达与胎儿的发育关系密切。研究发现, 胎儿长链多聚不饱和脂肪酸的摄入情况与胎龄,胎儿体重, 身长, 头围均有关［2］。母亲怀孕期间饮食中脂肪酸的构成对一些出生结局会造成影响, 包括胎儿的生长速度和胎龄［3］。

［1］ Y.Xu,S.Agrawal,T.J.Cook.Maternal Di-(2-ethylhexyl)-phthalate Exposure Infuences Essential Fatty Acid Homeostasis in Rat Placenta.Placenta, 2008, 29(11):962-969.

［2］ Gerard Hornstra.Essential fatty acids in mothers and their neonates.Am J Clin Nutr, 2000, 71:1262S-9S.

［3］ Olsen SF,Secher NJ.Low consumption of seafood in early pregnancy as a risk factor for preterm delivery: prospective cohort study.BMJ,2002,324(7335):447.

471009 洛阳, 郑州大学附属洛阳中心医院