刘志军

(湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410006)

化疗是目前治疗白血病的主要手段之一，而化疗过程中患者对化疗药物产生原发及继发多药耐药是化疗失败和预后差的重要因素[1]。柔红霉素(DNR)是治疗急性白血病的常用药物，可诱导白血病细胞凋亡。但很多白血病细胞对DNR具有一定的耐药性，影响白血病的化疗效果。核因子-κB(NF-κB)是细胞核内重要的转录因子。研究表明，在DNR诱导白血病细胞凋亡的同时，NF-κB也被激活[2]，它的激活被认为是许多肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性的关键因素[3-4]。抑制NF-κB活化是否可以降低白血病细胞对DNR的耐药性？我们采用Ad5F35-IκBαΔN 重组腺病毒将 NF-κB 的抑制蛋白IκBα转入K562/DNR细胞，观察感染后NF-κB活性变化及对K562/DNR细胞凋亡率的影响，以期为白血病细胞耐药性的逆转提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 材料

RPMI 1640培养基(美国Gibco公司)；柔红霉素(意大利Pharmacia公司)；AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡检测试剂盒 (美国 BD Phar Mingen公司)；NF-κB p65转录因子活性分析试剂盒(美国Active Motif公司)；细胞核提取试剂盒 (美国Active Motif公司)；K562/DNR细胞(中南大学湘雅医院血液实验室)；重组Ad5F35-IκBαΔN腺病毒(含第1～70位氨基酸位点发生突变的IκBα)(中南大学湘雅医院血液实验室)。

1.2 细胞培养

将其K562/DNR细胞置于含10%小牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI 1640培养基中。培养条件为37℃、5%CO2、饱和湿度。实验采用对数生长期细胞。

1.3 柔红霉素对K562/DNR细胞凋亡的诱导作用

根据柔红霉素作用的不同浓度和不同时间将标本分2组。12小时组：K562/DNR细胞和不同浓度的柔红霉素 (0.5μmol/L、1μmol/L和 2μmol/L)作用 12小时；24小时组：K562/DNR细胞和不同浓度的柔红霉素(0.5μmol/L、1μmol/L 和 2μmol/L)作用 24 小时。……