刘 军, 陈 显 化, 金 朝 霞, 王 冰, 张 宗 申

( 1.大连工业大学 辽宁省发酵工程重点实验室, 辽宁 大连 116034;2.周口师范学院 生命科学学院, 河南 周口 466000 )

0 引 言

金铁锁PsammosilenetunicoidesW.C. WuetC.Y.Wu是我国中成药保密品种“云南白药”的重要成分之一,属于珍贵濒危中药材。1999年作为国家二级保护植物被列入《国家重点保护野生植物名录(第一批)》[1]。

发根农杆菌是根瘤菌科农杆菌属的一种革兰氏阴性好氧土壤细菌,能感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物及个别裸子植物形成毛状根。毛状根具有生长速度快、遗传稳定性高、次级代谢能力强等生长优势[2-3]。随着大量珍贵中药材处于濒危灭绝和品种退化,利用发根农杆菌Ri质粒转化形成毛状根并建立毛状根液体悬浮培养体系成为当代植物生物技术的研究热点[4-5]。研究表明,在植物根系生长过程中,氮源的供应形式和浓度对根系建成、发育有很大影响,磷源和氮源之间也有协同作用。本实验研究了氮源和磷源对金铁锁毛状根在液体条件下的生长发育以及次生代谢成分积累的影响,研究结果对工业化生产金铁锁毛状根从而解决其药用资源紧缺问题具有重要意义。

1 材料和方法

1.1 材 料

发根农杆菌为本实验室保存的ACCC10060,购于中科院菌种保藏中心；金铁锁无菌苗为大连工业大学珍稀濒危药用植物细胞工程实验室培养。

1.2 方 法

1.2.1 菌种的活化及毛状根的诱导和培养

实验方法见参考文献[6]。

1.2.2 金铁锁的毛状根液体培养基的选择

选用B5、N6、MS、1/2MS、1/4MS不同的空白培养基对毛状根液体培养,半个月后观察结果。……