王晨枫，左玉柱，裴丽华，杨 震，范京惠

（河北农业大学动物科技学院，河北保定071001）

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea，PED）是由冠状病毒科冠状病毒属的猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）［1］引起的以严重腹泻和仔猪高致死率为主要特征的传染病。该病首次报道于英国，随后许多国家相继报道［2］，我国于1976年发现此病［3］。目前该病已成为中国甚至亚洲最常见的猪腹泻性传染病之一［4］。因此，PED的防控研究具有重要的意义。PED呈地方流行性，PEDV在流行的过程中为更好地适应环境，会发生变异，不同地区的毒株有显著差异，地区相距越远、环境差异越大的地方毒株差异越大。研究发现，S基因相比较于其他基因更易发生变异［5－8］，S蛋白是诱导机体产生中和抗体和提供免疫保护作用的主要结构蛋白［9－10］，具有高度免疫原性，此外，感染PEDV猪血清中的抗S蛋白抗体持久，可在长时间中检测到S蛋白的抗体。这些特性使其成为猪流行性腹泻的主要早期诊断蛋白。本研究对PEDV S基因抗原性较高的片段进行克隆并测序，利用大肠埃希菌表达系统对重组S蛋白进行表达和纯化，为建立PEDV的快速、敏感、特异的免疫学检测方法提供物质基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 毒株与实验动物 猪流行性腹泻病毒华北抚宁株（HB／FN）由河北农业大学兽医微生物实验室保存；6周龄～8周龄SPF级Balb／c小鼠购于北京东大实验动物中心。

1.1.2 主要试剂 Trizol为GIBCO公司产品；MMLV反转录酶、Taq DNA聚合酶、T4DNA连接酶、限制性内切酶BamHⅠ、XhoⅠ、pMD19－T载体、250bp DNA Marker、DNA Marker DL 5 000等为宝生物工程（大连）有限公司产品；DNA胶回收试剂盒、小量质粒纯化试剂盒、HRP标记的羊抗兔IgG羊及抗鼠IgG为CWBIO公司产品；……