汪 洋，檀华蓉，周冠宇，王希春，吴金节＊

（1.安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥230036；2.安徽农业大学生物技术中心，安徽合肥230036）

中药复方透皮贴剂（专利号：ZL 2010 1 0132973.2）为治疗奶牛乳房炎的纯中药制剂，含有黄连、马兰、木芙蓉、黄芩、紫花地丁等成分，具有清热解毒、行气活血散瘀等功效［1］。黄连的主要成分为盐酸小蘗碱［2］，黄芩的主要成分为黄芩苷［3］，木芙蓉中含有芦丁［4］，马兰、紫花地丁均含有黄酮类成分［5－6］。为了确定该复方中有效成分的含量，本试验建立了测定其中3种不同主要有效成分盐酸小蘗碱、黄芩苷、芦丁的高效液相色谱（high efficiency liquid chromatography，HPLC）方法，为制定该中药制剂的质量标准提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器设备 Waters高效液相色谱仪（600泵，2998紫外检测器）为美国Waters公司产品；Sartorius 1712电子分析天平为德国Sartorius公司产品；KQ－400KDE 超声波清洗器为昆山市超声仪器有限公司产品；RE－5203旋转蒸发仪为上海亚荣生化仪器有限公司产品；索氏提取器。

1.1.2 试剂 黄连、马兰、木芙蓉、黄芩、紫花地丁等均购于亳州济人药业有限公司；盐酸小蘗碱和黄芩苷对照品购于中国药品检验所（批号分别为A0151－20mg，A0016－20mg）；芦丁购于中国药品生物制品鉴定所（批号100080－200707）；乙腈、冰醋酸为色谱纯（TEDIA）；水为娃哈哈纯净水。

1.2 方法

1.2.1 色 谱 条 件 色 谱 柱：PhenomenexC18（4.6mm×150mm，5μm）。流动相：乙腈（B）－10mL／L冰醋酸（C）。洗脱方式：梯度洗脱（0→25min，B 20%→40%，C 80%→60%；25min→30min，B 40%→20%，C 60%→80%）。流速：1.0mL／min。检测波长：265nm。柱温：30℃。

1.2.2 溶液制备

1.2.2.1 对照品溶液制备 精密称取盐酸小蘗碱、芦丁对照品各10mg以及黄芩苷5mg，置于10mL量瓶中，用800mL／L甲醇溶解定容至刻度，即得3种对照品储备液。

1.2.2.2 供试品溶液制备 精密称取复方中所有中药材（粉碎后）1.8g置于平底烧瓶，用药材6倍量的600mL／L乙醇回流提取3次，每次3h。……