索南卓玛

（青海省海南州同德县畜牧兽医工作站，青海同德813200）

羊痘（Capripox，CP）是由羊痘病毒（Capripox virus，CPV）引起山羊、绵羊的一种接触性、急性、热性传染病［1－2］，以持续高热、全身的皮肤和黏膜上发生特异性痘斑（疤疹、丘疹、淋巴结病变等）为主要临床特征［3］。该病对全球养羊业和毛皮制造行业造成了极大的危害［4］，世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物疫病，我国也将其列为一类动物传染病，严重影响了我国羊类制品的出口贸易和国内养羊业的健康发展［1，5］。CPV 属痘病毒科（Poxviridae）脊椎动物痘病毒亚科（Chordopoxvirinae）羊痘病毒属（Capripoxvirus）［5］，基因组为双股线性DNA病毒，P32蛋白由Chand等于1994年首次发现［6］，后续研究表明P32蛋白是位于CPV囊膜表面的一种主要结构蛋白，含有主要的抗原表位，在病毒感染早期即可诱导体液免疫应答和细胞免疫应答，是激发机体产生抗体并产生保护性免疫的主要成分，是CPV中特异性高、免疫原性强的结构蛋白，是目前羊痘病毒研究的热点［7－10］。王芳 等［11］于 2009年表达了全长P32蛋白，其表达的全长P32蛋白用ELISA方法检测时反应性良好，但表达量非常低，增加了纯化的难度和成本。截短表达P32蛋白的主要抗原区域基本不影响蛋白的免疫原性，陈轶霞等［12］截短表达的羊痘病毒P32蛋白可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答，并能刺激小鼠产生较强的细胞免疫应答。鉴于此，本研究选择P32蛋白抗原性好的主要区域进行了表达，以期为CPV诊断方法的研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病毒、载体、菌种、血清 CPV疫苗株、克隆菌株 DH5α、表达菌株 BL21（DE3）、表达载体pET32a（＋）均由青海省西宁市动物疾病中心实验室保存；……