猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪博卡病毒多重PCR 检测方法的建立
2013-09-21王凯民张常印雷治海唐泰山
焦 洋,姜 焱,王凯民,张常印,雷治海,唐泰山
(1.南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;2.江苏出入境检验检疫局,江苏南京210001)
猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea,PEDV)和猪博卡病毒(Porcine bocavirus,PBoV)都是与猪腹泻相关的肠道病毒。其中由PEDV和TGEV引起的高度接触性腹泻性疾病,其临床症状、病理变化和流行病学极为相似,在临床和组织病理学上很难区分[1]。二者流行病学和病理剖检也极其相似,但两种病原没有共同的抗原性,不能交互免疫,但又能混合感染。
PBoV属于细小病毒科博卡病毒属,为单股线状无囊膜 DNA 病毒,基因组约5 200bp[2]。目前已经证实,多种博卡病毒,包括 HBoV、BPV、CnMV、GBoV能够感染并且导致宿主发生急性腹泻[3-7]。2010 年,Shan T L 等[8]在无临床症 状的猪粪便样品中检测到PBoV的广泛存在,阳性率为63.2%,说明PBoV可以在猪肠道中定殖并散毒。2012年胡军勇等[9]在临床腹泻样品中检测到了PBoV,阳性率高达69.35%,说明PBoV在腹泻猪肠道内广泛存在。目前的数据可以说明,PBoV与猪的腹泻疫情有一定的相关性,但是不能证明PBoV是原发性病原或者对其他猪腹泻病毒的暴发起到协同作用。
由于TGEV、PEDV这两种病毒临床上呈现出相似的症状,经常会发生混合感染,而PBoV又与腹泻疫情相关,为了评估PBoV与TGEV以及PEDV的流行是否有混合感染的现象,对这3种病毒进行了检测。由于临床诊断非常困难,因此必须依靠实验室检测技术进行鉴别诊断。以往的血清学诊断准确率低,病毒分离诊断方法虽然准确,但操作复杂,费时、费力。PCR方法因其具有快速、特异、灵敏、准确等优点,现己经广泛应用于畜禽传染病的快速诊断,目前已有很多文献报道使用单一PCR方法对腹泻病毒进行检测[10-11]。……
