王 爽，范振海，王钰莹，喻皇飞，刘祖林，胡锡阶，余丽梅

(遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室，贵州遵义 563099)

人脐带血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells，hUCB－MSCs)的研究始于本世纪初［1］，因其具有来源广泛、易于采集保存、不涉及伦理问题、对产妇及新生儿无伤害、增殖能力强、免疫原性低等优势，且具有向神经细胞、肝细胞、骨细胞、脂肪细胞等不同胚层细胞分化的潜能［2］，因而日益受到学科界关注。但是，目前关于hUCB－MSCs的体外分离培养方法不一，加上脐血中所含间充质干细胞的比例远低于骨髓，要获得较多数量的hUCB－MSCs仍有困难。研究人员大量尝试改进单个核细胞分离方法，不同密度接种，用不同的培养基培养hUCB－MSCs等。胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)是最常用的完全培养基中的重要添加物，近年来不少学者［3］采用人脐血清(human umbilical cord blood serum，CBS)代替胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)成功培养出hUCB－MSCs，不但培养周期短，且能保持hUCBMSCs良好的贴壁生长能力及间充质干细胞标志蛋白的稳定表达。但因CBS的获取数量毕竟有限，难以实现较大规模的培养所需，因此，本文应用部分CBS合用FBS培养hUCB－MSCs，观察了hUCB－MSCs形态与表面标志的变化。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本采集 脐带血标本来源于遵义市妇幼保健院妇产科剖宫产胎儿，并经产妇及其家属知情同意。产妇健康，排除HBV、HCV和HIV、梅毒感染者，脐血采集后4 h内进入实验流程。

1.1.2 CBS制备 采集脐带血，4 ℃静置2 h，吸取血清，2000 r/min离心10 min，留取上清，56℃水浴30 min，分装，－20℃保存备用。取部分血清检菌，无菌生长者用于后续细胞培养实验。

1.1.3 主要试剂 Oricell Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell Growth medium(OHUCMSC培养基，Cyagen公司)、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，Gibco 公司)，Ficoll分离液(天津灏洋)、羊抗人波形蛋白单克隆抗体(Sigma公司)，间充质干细胞流式细胞术表型鉴定试剂盒A(BD Bioscience公司)。……