李淑英 聂莹 杜欢 赵仲麟 袁超 李燕 宋晓燕 唐选明

纳豆激酶（Subtilisin NAT）是由枯草芽孢杆菌分泌表达的高效纤维蛋白溶解酶，最早从传统的日本大豆发酵产品纳豆中发现［1］。纳豆激酶对纤维蛋白显示了极高的底物特异性［2］，其血栓溶解活性是纤溶酶的4倍［3，4］。纳豆激酶可以直接溶解交联状的血栓块，还可以催化血纤维蛋白溶酶原转化为血纤维蛋白溶酶，增加体内血栓溶解因子的合成，失活纤维蛋白溶解抑制剂等［4-7］。纳豆激酶除了溶解血栓外，还可以降血压、血脂和胆固醇［8］，诱导晚期玻璃体分解，治疗玻璃体视网膜紊乱病人等［6］。与临床应用的溶栓药物相比，纳豆激酶具有溶纤活性高、安全可靠、无毒副作用、半衰期长、在胃肠道中稳定性好等优点。该蛋白除了静脉注射外，还可以口服，生产成本低廉［6，9］，具有重要的开发价值。

优化培养基组成和发酵工艺，可以明显提高芽孢杆菌的纳豆激酶产量［9-11］。本试验对分离筛选的纳豆激酶生产菌BSNK-5进行了菌落形态观察和分子鉴定；并采用单因素和正交试验对筛选菌株产纳豆激酶的液体发酵条件进行了初步研究，以期提高纳豆激酶产量，为该酶的进一步扩大培养奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种 纳豆枯草芽孢杆菌（Bacillus natto）BSNK-5，由本实验室分离并保存。

1.1.2 主要试剂 纤维蛋白原（牛血，批号：140626-201009）、尿激酶标准品（1280U/支）和凝血酶（560U/支）均购于中国药品生物制品检定所，LB Broth Ultrapure（USB），酵母浸粉（南通香地生物有限公司），胰蛋白胨（OXOID），其余试剂均为国产分析纯。……