刘彦礼 李旭 苏振成 徐明恺 张惠文

自1993年第一次出现有关荧光定量PCR技术的记录，1996年ABI（Applied Biosystems）公司使荧光定量PCR（real-time fluomgenetic quantitative PCR，FQ-PCR）技术商业化，并制造出第一台荧光定量PCR仪，迄今因该技术较以往核酸定量研究方法，如Nothern blotting、RNase-protection、Semiquantitative RT-PCR等，具有灵敏度高、特异性和可靠性好、自动化程度高、具实时性和准确性等特点，所以目前广泛应用于分子生物学研究和医学研究等领域［1-4］。实时荧光定量PCR是在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术。它是通过在PCR反应体系中加入荧光基团（探针类和染料类），利用每个循环末对荧光信号积累的捕捉来实时监测整个PCR进程，从而建立起荧光量与初始模板量的对应关系，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法［5］。对于荧光定量PCR数据分析方法包括绝对定量和相对定量两种。前者是应用精确定量的标准品，构建标准曲线，以此来定量未知样品中初始基因拷贝数。虽然该方法能够直接得到目的基因的拷贝数，且具有稳定、直观等优点，但是其数据可靠的前提是得到精确定量的标准品，鉴于目前核酸定量技术的不足，标准品的制备无统一标准，所以数据缺乏可比性；而且标准品与试验样品扩增效率的差异也影响了该方法应用；再者绝对定量也不适合高通量的定量分析。而相对定量在一定程度上弥补了绝对定量的不足，其是指在测定目的基因的同时测定一内源性稳定表达内参基因，通过比较处理前后的目的基因相对于内参基因归一化的比值，来衡量目的基因在处理前后的表达差异，并不需要确定目的基因具体的拷贝数。……