茎环结构DNA电化学传感芯片对PML/RARα mRNA的检测

2013-09-13陈婧

电子测试 2013年16期

关键词：检测

陈婧

（厦门大学附属第一医院,福建厦门,361000）

急性早幼粒细胞白血病（APL）是一种常伴有严重出血的急性白血病，PML/RARα融合基因是其特异的分子学标志，检测PML-RARα融合基因能够协助急性早幼粒细胞白血病诊断。电化学DNA传感技术是近年来迅速发展的一种检测手段，具有方便、快捷、灵敏、低廉等优点。其近年新兴起的多通道生物传感芯片技术结合能够实现一次操作多次检测，高效快捷具有广泛的应用前景。

本文根据PML/RARα融合基因的碱基序列设计了茎环结构探针,并构建了多通道电化学传感芯片对PML/RARα 融合基因进行了检测，研究了其特异性、灵敏性、重现性等方面的性能。

1 实验

1.1 主要试剂

主要试剂：以下寡核苷酸由从宝生物工程（大连）有限公司（TaKaRa）

1.2 APL靶序列探针的设计

根据NCBI基因数据库，查找出 PML/RARα融合基因的融合位点，选择位点前后的碱基作为探针使用，同源比对显示APL的特异性序列为：5‘-…-GGG GAG GCA G CCA TTG AGA CCC-…-3’

1.3 HP/MCH芯片的制备

茎环结构（HP）的捕获探针需要预先形成环，把HP储备液用探针成环溶液配成适当的浓度，4℃过夜，备用。将3.2μL不同组装密度在组装液滴加在金电极表面上，室温静置2小时后，用Tris-HCl缓冲液洗去未连接的茎环探针。在已组装HP的通道中加入在2 mM的巯基己醇（MCH）100μL，室温密闭过夜。MCH处理后的芯片通道表面上固定了一层捕获探针和巯基分子的混合组装层。