陈健旋 施伟梅 陈建福

（1 漳州职业技术学院，食品与生物工程系，福建漳州363000; 2.赣南医学院，药学院，江西赣州 341000）

流动注射化学发光法测定甲苯磺丁脲

陈健旋1施伟梅2陈建福1

（1漳州职业技术学院，食品与生物工程系，福建漳州363000;2.赣南医学院，药学院，江西赣州 341000）

在碱性介质中，铁氰化钾氧化鲁米诺产生化学发光，甲苯磺丁脲对该体系有强烈的增敏作用。基于此并结合流动注射技术，建立了流动注射化学发光测定甲苯磺丁脲的新方法。在优化的实验条件下，测定甲苯磺丁脲的线性范围为1.0×10-8mol/L 6.0×10-5mol/L，检出限为3.6×10-9mol/L，对于浓度为7.8×10-6mol/L的甲苯磺丁脲连续测定11次，测定值的相对标准偏差为1.2%，以片剂为基体，用标准加入法检验方法的回收率，测得结果在99.6%～100.5%之间，该方法用于甲苯磺丁脲片剂中甲苯磺丁脲的定量分析，结果满意。

化学发光 甲苯磺丁脲 流动注射 铁氰化钾 鲁米诺

糖尿病是一种内分泌代谢性疾病，发病率有逐年增高的趋势，已成为威胁人类生命的杀手之一。甲苯磺丁脲是磺酰脲类口服降血糖药，在人体内能促进胰腺胰岛细胞分泌胰岛素，增加门静脉胰岛素水平，抑制肝糖原分解和糖原异生作用，减少了肝生成和输出的葡萄糖，同时也会促使胰外组织对胰岛素的敏感性和糖利用的增加，用于非胰岛素依赖型糖尿病，具有明显的临床疗效，在治疗糖尿病的药物中占有重要的位置[1-2]。目前测定甲苯磺丁脲的方法主要有滴定法[1]、分光光度法[2]、薄层色谱法[3]、液-质谱法[4]、茚三酮法[5]、气相色谱法[6]、高效液相色谱法[7-8]等，而尚未有化学发光法测定甲苯磺丁脲的文献报道。在实验中发现，在碱性介质中，甲苯磺丁脲对鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系有明显的增敏作用，据此结合流动技术建立了测定甲苯磺丁脲的流动注射化学发光分析法[9]，并用于甲苯磺丁脲片剂中甲苯磺丁脲含量的测定。这为甲苯磺丁脲的测定提供了一个简便易行、灵敏度和精密度高、分析线性范围宽的新方法。

1 实验部分

1.1 主要原料和试剂

甲苯磺丁脲（北京中科三捷生物科技有限公司）标准储备液：准确称取2.7035g的甲苯磺丁脲标准品，用无水乙醇溶解后，用蒸馏水定容于100mL的棕色容量瓶中，得0.1 mol/L标准溶液，使用时用蒸馏水逐级稀释至所需浓度。

鲁米诺（美国Sigma公司）标准储备液：准确称取1.7716g的鲁米诺，用0.01mol/L的碳酸钠溶液溶解，并用0.01 mol/L的碳酸钠溶液定容于100mL棕色容量瓶，配制成0.1 mol/L标准溶液，避光保存。

铁氰化钾（汕头西陇化工有限公司）溶液、NaOH溶液等按常规配制，使用时用逐级稀释至所需浓度。

实验中所用的其他药品均为分析纯，蒸馏水为二次蒸馏水。

1.2 实验仪器

IFFM-D流动注射化学发光分析仪，IFFS-A型多功能化学发光检测器（西安瑞迈电子科技有限公司）。

1.3 实验方法

流动注射化学发光分析系统流路如图1，铁氰化钾和鲁米诺分别从a和b流路流入并混匀，蒸馏水从c流路中流入，作为空白对照试验，记录其发光信号强度(I0)，待空白信号稳定后，用一定浓度的甲苯磺丁脲标准溶液替代蒸馏水从c流路中流入，记录发光信号强度为(Is)。用ΔI(ΔI=Is-I0)表示两者的相对发光强度，并进行定量测定（见图1）。

2 结果与讨论

2.1 化学发光反应动力学曲线

采用静态注射化学发光分析法研究了常温下该化学发光体系的静态动力学曲线，如图2所示，分别考察了甲苯磺丁脲加入前后鲁米诺—铁氰化钾体系的化学发光反应的动力学曲线。将甲苯磺丁脲（或蒸馏水，做对空白对照）注入到鲁米诺和铁氰化钾的混合溶液后，反应产生显著的化学发光，发光强度从注入到到达峰值时所需时间为5s，由峰值衰减至零时只需13s。由此可见此该化学发光反应的速度很快，且甲苯磺丁脲的加入，对鲁米诺—铁氰化钾化学发光体系有增敏作用，结合流动注射技术可对甲苯磺丁脲进行测定（见图2）。

2.2 反应条件的选择

2.2.1 反应介质pH值的影响

经实验研究发现在碱性条件下，鲁米诺—铁氰化钾体系化学发光反应有较好的发光信号，且反应介质体系的pH值对发光反应有重要的影响。固定鲁米诺浓度4.0×10-6mol/L、铁氰化钾浓度6.0×10-4mol/L，考察了pH值在11～13范围内对化学发光增敏相对发光强度ΔI/I0的影响，如图1所示。从图1中可以看出，随着pH值的增大，化学发光增敏相对发光强度ΔI/I0先不断增大，当pH值达到12时相对发光强度达到最大值，而随后发光强度随着pH值的增大又开始减小。这是因为碱性较低时，信号较差，对于低浓度的检测较为不利，但碱性太强时背景信号过高，而使得信噪比反而下降，故最佳的pH 值选择为12（见图3）。

2.2.2 鲁米诺浓度的影响

鲁米诺是该化学发光体系中的发光试剂，其浓度对化学发光强度影响很大。固定体系的pH为12，铁氰化钾浓度6.0×10-4mol/L，考察了鲁米诺浓度在2.0×10-6～6.0×10-6mol/L范围内对化学发光增敏相对发光强度ΔI/I0的影响，如图2所示。从图2中可以看出，随着鲁米诺浓度的增大，化学发光增敏相对发光强度ΔI/I0也逐渐增大，当鲁米诺溶液浓度在4.0×10-6mol/L时，相对发光强度ΔI/I0达到最大。这是因为鲁米诺浓度过低时，化学发光强度较弱，增敏效果较差；而当鲁米诺浓度过大时，背景发光信号过强，基线漂移严重，反而使得信噪比下降。故鲁米诺的最佳浓度选择为4.0×10-6mol/L（见图4）。

2.2.3 铁氰化钾浓度的影响

铁氰化钾是该化学发光体系中的氧化剂，其浓度对化学发光强度的影响也很大。固定体系的pH为12，鲁米诺浓度4.0×10-6mol/L，考察了铁氰化钾浓度在4.0×10-4～8.0×10-4mol/L范围内对化学发光增敏相对发光强度ΔI/I0的影响，如图3所示。从图3中可以看出，随着铁氰化钾浓度的增大，化学发光增敏相对发光强度ΔI/I0先增大，当铁氰化钾浓度为6.0×10-4mol/L时，相对发光强度ΔI/I0达到最大值，而后随着铁氰化钾浓度的增大，相对发光强度ΔI/I0又开始减小。这是因为铁氰化钾浓度过低时，氧化能力较弱，使得化学发光强度较小；而当铁氰化钾浓度过高时，氧化剂过量，反而使得发光体系信噪比下降，而使得相对发光强度ΔI/I0的减小，故铁氰化钾的最佳浓度选择为6.0×10-4mol/L（见图5）。

2.3 校准曲线、精密度和检出限

按照实验方法在选定的最佳条件下对不同浓度的甲苯磺丁脲溶液增敏鲁米诺—铁氰化钾化学发光体系的相对发光强度进行测定，绘制工作曲线。结果表明，样品浓度在1.0×10-8mol/L 6.0×10-5mol/L范围内体系的相对发光强度ΔI/I0与其浓度呈良好的线性关系。为了提高所测定体系的准确度和精密度，校准曲线按甲苯磺丁脲溶液浓度的数量级分段绘制。校准曲线的基本参数如表1所示。对浓度为7.8×10-6mol/L的甲苯磺丁脲溶液进行平行测定11次，得相对标准偏差为1.2%，根据IUPAC建议，计算方法检出限为3.6×10-9mol/L。

2.3 干扰实验

实验测试了甲苯磺丁脲溶液中可能存在的无机离子及有机物对本方法的干扰来评价所建立分析方法的选择性，以7.8×10-6mol/L的甲苯磺丁脲标准溶液做干扰实验。实验结果表明，当相对误差小于±5%时，500倍的淀粉、环糊精、Na＋、K＋，200倍的蔗糖、F—、Cl—、CN—、NO3—、100倍的葡萄糖、Mg2＋、Ca2＋、Br—，10倍的柠檬酸、乳糖均不干扰测定，而格列奇特对本实验干扰严重。在甲苯磺丁脲片剂中，辅料主要为环糊精及淀粉，溶解过滤后对定量分析基本无影响。

表1 校准曲线回归方程Tab.1 Regression equations of the calibration curves

表2 甲苯磺丁脲和回收率测定结果Tab.2 Determination results of Tolbutamide and recovery experiments

2.4 样品分析

取甲苯磺丁脲片剂20片（吉林万通药业有限公司），准确称取质量后，求得每片的平均质量，研磨，分别取药品粉末量0.015g、0.025g、0.05g、0.075g各三份，用乙醇溶解，滤去杂质，用蒸馏水定容，稀释到测试范围内，同时作加标回收率，结果见表2。从表2中可知，加标回收测得的回收率在99.6%～100.5%之间，结果满意。

2.5 机理分析

在碱性条件下，鲁米诺被铁氰化钾氧化产生化学发光，是因为该氧化还原反应产生激发态的3-氨基邻苯二甲酸，而激发态不稳定，容易发生跃迁，当从激发态跃迁到基态时，释放的能量以光子的形式存在，而产生化学发光[10]。当少量的甲苯磺丁脲存在时，相对化学发光强度ΔI/I0具有明显的增敏作用。这是因为甲苯磺丁脲分子中含有还原性强的亚胺基（=NH）等基团，在碱性介质中能被铁氰化钾氧化，生成能量较高的中间产物自由基，而生成的中间产物自由基在跃迁过程中能氧化鲁米诺产生化学发光[11]。推测该反应机理如下：

3 结论

在碱性条件下，基于甲苯磺丁脲对鲁米诺—铁氰化钾化学反应发光体系具有增敏作用，并对影响化学发光的各种因素进行了研究，建立了鲁米诺—铁氰化钾体系流动注射化学发光测定甲苯磺丁脲的新方法。在最佳条件下，甲苯磺丁脲浓度在1.0×10-8mol/L～6.0×10-5mol/L范围内体系的相对发光强度ΔI/I0与其浓度呈良好的线性关系。该方法具有简便易行、灵敏度和精密度高、分析线性范围宽等优点，可用于甲苯磺丁脲片剂中甲苯磺丁脲含量的测定。

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Determination of Tolbutamide by Chemiluminescence Method based on Luminol—Potassium Ferricyanide System

Chen Jianxuan1Shi Weimei2Chen Jianfu1
（1Zhangzhou institute of technology, Department of Food and Biology Engineering，Fujian Zhangzhou 3630002College of Pharmacy ,Gannan Medical University,Jiangxi Ganzhou 341000）

A highly sensitive chemiluminesence(CL) method for the determination of Tolbutamide by flow injection analysis was developed, based on that the CL intensity of Luminol-K3Fe(CN)6 systems was enhanced by Tolbutamide. The relationship between the CL intensity and the concentration of Tolbutamide was in a linear range from 1.0×10-8to 6.0×10-5mol/L. The detection limit of Tolbutamide was 3.6×10-9mol/L, Precision of the method was tested at the content ration level of 7.8×10-6mol/L of Tolbutamide for 11 determinations, and value of RSD was 1.2%. Test for recovery was made by standard addition method using tablets samples as matrixes, results of recovery were in the range of 99.6%～100.5%. The proposed method was applied satisfactorily to the determination of Tolbutamide in tablets.

chemiluminescence analysis; Tolbutamide; fl ow injection; Potassium Ferricyanide uminol.

O657.3，R917

A

T1672-8114(2013 )06-051-06

陈健旋（1965- ），女，汉族，福建漳州人，副教授，从事食品安全与药物分析的教学及科研