张荣跃，单红丽，王晓燕，尹 炯，申 科，罗志明

（云南省农业科学院甘蔗研究所/云南省甘蔗遗传改良重点实验室，开远 661699）

甘蔗宿根矮化病（Ratoon Stunting Disease，RSD）是一种世界性的重要甘蔗病害，由一种寄居木质部的细菌（Leifsonia xyli subsp.xyli，Lxx）引起[1]。蔗株染病后矮化，分蘖减少，蔗茎变细，节间缩短，一般减产12%～37%，蔗糖分降低0.5个百分点[2]。RSD没有明显的外部和内部症状，从外观难以鉴定，从而导致病害广泛蔓延传播，该病主要通过带病蔗种和收获、砍种刀具等传播蔓延，且传播性极强[3]，目前有效的防治方法是生产、繁殖和推广脱毒健康种苗。

目前我国对甘蔗宿根矮化病菌的检测方法主要使用PCR检测法。由于Lxx主要寄生于蔗株维管束组织，所以PCR检测RSD主要使用甘蔗汁，但使用甘蔗汁检测RSD取样和取汁程序比较繁琐，而且榨汁过程容易污染，并且对于甘蔗苗期和组培苗等无法取汁进行检测，有其局限性，采用甘蔗其它部位检测RSD可避免这些情况。本文采用常规PCR方法对甘蔗不同部位进行了多次重复检测，比较了甘蔗不同部位与蔗汁检测RSD的准确率，为今后使用甘蔗其它部位检测RSD提供科学数据。

1 材料与方法

1.1 样品采集

供试样品采自于云南省农业科学院甘蔗研究所第二科研基地脱毒种苗试验对照，株龄10个月，品种为粤糖93-159和ROC25，每个品种随机取样3株，每株取不同部位（叶片、叶鞘、茎尖、茎部组织）和蔗汁[4]，3株同一品种甘蔗的同一部位混合成一个样品，置于-20℃保存备用。

1.2 PCR检测

1.2.1 甘蔗总DNA提取 甘蔗样品用液氮磨成粉末，取约0.3g于1.5mL离心管中，立即加入1000 μL 65℃预热的2%CTAB提取液，65℃水浴1h，期间颠倒离心管数次；……