陈 倩，张 明，王海军，丁 宇

1解放军总医院 南楼心血管一科，北京 100853；2上海交通大学医学院附属仁济医院 肝外科，上海 200127

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是多种心脑血管事件形成的病理学基础，其发生的原因和机制一直是医学领域内的重要研究课题。近年来研究发现缺氧在AS的发生发展过程中扮演了十分重要的角色[1-4]。缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)是机体缺氧应答机制的核心效应分子，其中HIF-2α与血管内皮细胞功能、炎性反应以及脂质代谢的关系最为密切[5]。本实验拟通过建立HIF-2α基因敲除小鼠模型，通过高脂饲料喂养，了解HIF-2α基因对动脉粥样硬化病变形成的影响。

资料和方法

1 实验动物 HIF-2α-LoxP标记小鼠(JAXMICE：008407)和Mx-Cre转基因小鼠(JAXMICE：003556)从美国Jackson实验室引进。ApoE基因缺陷(ApoE-/-)小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。所有研究均采用雄鼠，8~12周龄，体质量20~28 g。

2 建立HIF-2α基因敲除小鼠模型 HIF-2α-LoxP标记小鼠和Mx-Cre转基因小鼠交配后，经过两次传代和基因型鉴定筛选，获得Mx-Cre阳性且HIF-2α纯合LoxP标记小鼠。对这种小鼠进行连续3次腹腔注射聚肌胞，每4 d 1次，通过诱导干扰素产生后即可获得全身HIF-2α基因敲除(HIF-2α-/-)小鼠[6]。小鼠基因型鉴定采用鼠尾标本的普通PCR鉴定,确认目的基因敲除则采用HIF-α激活剂DMOG 8mg腹腔注射3h后肝组织标本的HIF-2α免疫印迹分析。Mx-Cre阴性HIF-2α纯合LoxP标记小鼠为野生型对照小鼠。

3 分组及方法 同龄HIF-2α-/-小鼠、野生型小鼠及ApoE-/-小鼠每组6只，进行高脂高胆固醇饲料喂养8周。高脂饲料(0.15%胆固醇、 25%猪油、5%糖、85%基础饲料)购自中国医学科学院实验动物研究所。所有实验动物8周后取主动脉10%甲醛固定，石蜡包埋，进行常规HE染色，观察主动脉粥样硬化病变情况。……