田春雨 薄海美 喇孝瑾 李继安 韩 刚 江春花 董玉山 杜晨光

(河北联合大学中医学院，①临床医学院 河北唐山 063000)

糖尿病是由胰岛素缺乏和(或)胰岛素生物作用障碍导致的糖、蛋白质和脂肪代谢紊乱为特征的一种慢性进行性疾病。目前糖尿病患病率和患者人数快速增长，2011年11月公布的一项数据中显示，目前我国已经确诊的糖尿病患者人数高达9 240万人，成为世界上糖尿病患者最多的国家，发病率也高达9.7%。中药在治疗糖尿病方面有着自己独特的优势(多组分、多靶点)，不仅降低血糖，更重要的是通过辨证论治的方法整体调节人体机能，解除患者临床症状，防治多种慢性并发症，改善患者的生活质量，延长寿命。我们参考了李东垣《脾胃论》治疗消渴的“升阳降火汤”[1]组方原则及《医学衷中参西录》滋膵饮的药物配伍，自拟了双益降糖方(由葛根、黄连、黄芪、山茱萸等药组成)，在临床上取得了良好的疗效。为了提高双益方制剂质量，我们将该方中葛根所含的葛根素作为质量标准之一，进行了正交设计的筛选，以期获得良好的提取工艺。

1 材料与仪器

高效液相色谱仪(Waters 1210);BS224S精密电子天平。葛根素(购自中国药品生物制品检定所，批号110752－200912)，流动相所用试剂均为色谱纯。黄连、黄芪、葛根、山茱萸等药物购于唐山市北京同仁堂药店。

2 方法与结果

2.1 含量测定方法

2.1.1 色谱条件。色谱柱为 Hypersil ODS 5μm(4.6 mm ×100 mm)，流动相为甲醇:水 =22:78，流速:1.0 mL/min，检测波长:250nm。

2.1.2 供试溶液的制备。对照品溶液制备:精密称取葛根素对照品适量，用甲醇制成每1 mL含0.05 mg的溶液。供试品溶液制备:取双益降糖复方醇提干膏0.05g，加乙醇溶液100 mL，超声提取，滤过，取滤液，即得。

2.1.3 方法学考察

2.1.3.1 线性关系考察。分别配制不同浓度的葛根素对照品

2.1.3.2 精密度试验。精密吸取同一对照品溶液20μL，重复进样6次，结果葛根素对照品峰面积值的RSD=1.31%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.1.3.3 稳定性试验。按照“2.1.2”项下方法操作，考察同一供试品溶液12 h内测定稳定性，结果RSD=1.29%(n=6)，表明本品在12 h内测定稳定性良好。

2.1.3.4 重复性试验。按照“2.1.2”项下方法操作，对同一样品依法测定6次，结果RSD=1.38%(n=6)，表明本法重复性良好。

2.1.3.5 加样回收率试验。平均回收率为99.52%，RSD=1.26%(n=6)。

2.2 提取工艺研究

2.2.1 正交试验设计。对主要因素乙醇浓度、溶剂量、回流提取时间及提取次数进行L9(34)正交实验，对提取工艺进行优选，对提取的干膏进行葛根素含量测定。以葛根素含量为指标，正交因素水平表及结果见表1、表2。

表1 正交试验因素水平表

表2 提取工艺L9(34)正交试验结果

2.2.2 方差分析

表3 葛根素含量方差分析

按葛根素的含量进行方差分析，A有显著影响，影响因素A＞C＞B＞D，最优组合A2B1C1D3，即乙醇浓度为30%，加醇量为6倍，提取3次，每次1h。

2.2.3 验证试验。为验证制备工艺的可靠性，在A2B1C1D3条件下对6个批次的样品进行了试验，结果葛根素含量分别为0.8526%、0.8678%、0.8496%、0.8522%、0.8650%、0.8528%，RSD为0.89%(n=6)，表明本试验优选的工艺合理。

3 讨论

3.1 古今文献研究 历代医家非常重视脾肾二脏虚弱及饮食所伤在消渴发病中的作用。如《灵枢·本脏篇》认为:“脾脆则善病消瘅易伤，肾脆则善病消瘅易伤。”此说明脾肾亏虚是糖尿病易发病的基础。《素问·奇病论》又曰:“脾瘅，此肥美之所发也，此人必数食甘美而多肥也，肥者令人内热，甘者令人中满，故其气上溢，转为消渴”。这说明古人已经清楚认识到饮食不节是糖尿病发病的重要诱因。脾亏运化力弱，肥甘太过容易困脾，水谷精微无法上输于肺，肺津干涸，化燥生热则口渴喜饮;肺津不足，则不能濡养胃阴致胃火亢盛，腐熟水谷力强，故多食易饥。肾亏则“下焦命门火不归元，游于肺则为上消，游于胃则为中消。”这说明脾肾亏虚是导致消渴之本，肺胃有热则是消渴之标，肥甘厚味是致病之因。据此，我们参考李东垣《脾胃论》治疗消渴的“升阳降火汤”[1]组方原则及《医学衷中参西录》滋膵饮的药物配伍，自拟了双益降糖方，方中黄芪益气健脾;山萸肉补肾涩精;葛根升发脾胃之阳气，生津止渴;黄连具有清热燥湿，泻火解毒的功效。四味药为方中主要药物，在临床使用中取得了良好的疗效。

3.2 前期研究 表明双益降糖方对2型糖尿病大鼠具有降糖、降脂的作用，其作用机制可能与胰岛细胞保护和改善胰岛素抵抗有关[2]。葛根素为该方的主要成分之一，并且其所含葛根素是改善胰岛素抵抗的有效成分，实验研究显示葛根素可有效降低糖尿病大鼠血糖、血清果糖胺的含量，减少主动脉AGEs(晚期糖基化终末产物)的沉积，控制糖尿病血管病变的发生发展[3]。临床研究显示葛根素能够降低糖尿病患者空腹及餐后血糖，改善胰岛素抵抗，改善血脂、血液流变学指标[4]。因此在本方提取工艺时选用了葛根素作为本方制剂质量控制的指标之一。

本实验选用不同浓度乙醇回流提取，对提取工艺参数进行了正交试验优选，乙醇浓度对葛根素的提取有显著影响，正交试验优选得到的工艺稳定、可行。本实验的研究可为双益降糖复方制剂工艺及质量控制标准的制定奠定基础。

[1] 李步满，吴深涛.李东垣阴火理论与消渴病治疗思路[J].河北中医，2007，29(5):451

[2] 刘志霞，张艳平，吴范武，等.双益方改善2型糖尿病大鼠糖、脂代谢及作用机制的初步研究[J].辽宁中医杂志，2012，39(2):221

[3] 茅彩萍，顾振纶.葛根素对糖尿病大鼠主动脉糖基化终产物的形成及其受体表达的影响[J].中国药理学通报，2004，20(4):393

[4] 于 健.葛根素治疗2型糖尿病患者胰岛素抵抗的临床研究[J].山东中医杂志，2001，20(12):727