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西部马脑脊髓炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法建立及标准质控品制备

2013-08-24吴亚琼高志强乔彩霞张鹤晓吴清民

中国动物检疫 2013年11期
关键词:标准检测方法

谷 强,吴亚琼,高志强,刘 环,张 伟,蒲 静,乔彩霞,张鹤晓,吴清民

(1. 中国农业大学 动物医学院,北京 100094;2. 北京出入 境检验检疫局,北京 100026)

西部马脑脊髓炎病毒(western equine encephalitis virus, WEEV)为披膜病毒科甲病毒属成员,可引起人和的发病,病马常呈亚临床感染,病症相对温和,感染马的致死率低于30%。该病潜伏期5~14d,临床症状包括发热、厌食和精神高度沉郁。严重时,病马表现为狂躁不安、失明、共济失调、精神极度沉郁、卧地不起、痉挛,最后可导致死亡。人感染本病毒后,患者表现为高热,头痛,痉挛,呕吐和嗜睡,有的迅速发展为昏迷状态而死亡。WEEV对人的致死率为明显低于东部马脑脊髓炎病毒[1-2]。我国于1990年分别从新疆乌苏县的一组赫坎按蚊和博乐县的全沟硬蜱中分离出WEEV[3]。西部马脑脊髓炎为我国出入境检验检疫中规定的一类检疫对象。 随着马匹国际贸易和国际赛事的日益频繁,来自不同的国家和地区、健康状况不同的马匹可能将该病带进我国,对此除实施严格的隔离检疫制度之外,开展西方马脑炎的快速检测技术也非常重要。

WEEV为单股正链RNA病毒,全长为11.5kb左右。基因组编码4种非结构蛋白(NSP1~4)和5种结构蛋白(衣壳蛋白C,包膜糖蛋白E1、E2、E3,6K,基因排列顺序为 5’-C-E3-E2-6K-E1-3’)。E2蛋白是该病的主要保护性抗原,具有7个部分重叠的抗原表位,分别与血凝抑制、中和病毒和抗病毒感染活性有关,而E2-1区中的C区是甲病毒属特异性抗原表位,含病毒与细胞作用的受体[4]。

目前西部马脑脊髓炎主要检测方法包括病毒分离和鉴定,血清学检测方法(血凝抑制和ELISA)以及基于RT-PCR的检测方法[1]。……

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