张荣华 王冰

哈药集团技术中心 黑龙江哈尔滨 150025

为了达到基因治疗的目的，目前已经建立许多基因转导的方法，这些方法为基因治疗的最新进展做出了很大的贡献。哺乳动物细胞转染技术就是将构建出来的目的基因通过载体导入不同的哺乳动物细胞内，进行基因功能研究的方法，转染大致可分为物理转导、化学转导和病毒转导三种途径。

物理转导

是利用物理力量导致细胞膜的瞬间缺损，从而使DNA 质粒进入细胞内的方法，如电穿孔法、基因枪法、注射法等。

注射法:直接将DNA 质粒注射入组织细胞中以达到基因转导的目的。注射法还可以将裸露的DNA 质粒注射入肌肉、肝脏、皮肤等组织，有研究报道将DNA 质粒逆行注入到肝静脉和胆管后能够高效表达［1］。

基因枪法:是把压缩气体(氮或氦)转换成气体时所产生的冲击波作为动力，把DNA 质粒直接射入组织、细胞和细胞器中，基因枪导入的基因被证明可在各种类型的细胞中得到瞬时高效表达。

电穿孔法:通过短暂高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，将DNA 质粒导入细胞内。电穿孔法是一种既可以用于体外也可以用于体内的基因转移方法。目前体内用电穿孔法导入基因主要用于皮肤和肌肉组织。Molnar 等于2004 年［2］，采用电穿孔法将外源基因导入免疫缺陷鼠体内，此基因稳定表达超过1 年时间。王强等用电穿孔法将pGFP 质粒导入K562 白血病细胞中［3］，获得90%以上的表达绿色荧光的细胞，稳定表达半年以上。……