王 琦， 刘宏利， 张中东， 虞攀峰， 初 冬

(中国人民解放军空军总医院急诊部， 北京 100036)

许多研究及本课题前期实验中已证实，脐带来源间充质干细胞体外诱导条件下可以分别向骨、软骨、脂肪组织分化，是组织工程良好的种子细胞。本研究在前期的实验中发现胶原蛋白支架与MSCs具有很好的生物相容性，MSCs可以在胶原蛋白支架中逐渐贴附，随着培养时间的延长，细胞长入孔隙内[1]，进一步用免疫组织化学的方法观察人脐带间充质干细胞在胶原蛋白支架培养两周后细胞特性变化，为作为组织工程复合体材料制备打下实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料:人脐带间充质干细胞分离自健康足月产妇脐带，Ⅱ型胶原蛋白购买自北京贝菱公司，是将18个月龄的健康牛跟腱通过酶解获得，DMEM培养基采用市售产品，免疫组化ABC试剂盒购买自DAKO A/S Denmark，CD 44、CD105、HLA-DR、Ⅰ型胶原抗体购于中山公司。

1.2 方法

1.2.1 人脐带间充质干细胞(human umbilical MSCs，hU-MSCs)的培养细胞表面标志鉴定及体外分化实验:将脐带血管内血液挤净，再将包裹着血管的Wharton胶剪下、剪碎。将组织小块收集于50mL离心管内，反复清洗2-3次，清洗后的组织小块种植于100 mm培养皿，加入含10%FBS的a-MEM培养基，在37℃、饱和湿度5%浓度的CO2培养箱内培养，隔2日更换培养基，细胞达到80%汇合时更换新鲜培养液，次日胰酶消化传代，计数后接种于新的培养瓶。取第4代生长状态良好细胞，制备成单细胞悬液，上流式细胞仪检测。体外分化实验进行MSCs体外成骨和成脂肪能力鉴定。

1.2.2 支架与细胞共培养:将胶原……