陶 韬，陈 虹，顾雪霜，周俊豪，彭单伊，张丽君（重庆医科大学附属第一医院呼吸内科，重庆 400016）

血管生成是肿瘤生长、浸润和转移的必要条件，抗血管生成疗法成为治疗肿瘤的新策略。目前已发现许多因子参与血管的生成与调控，其中血管内皮钙黏蛋白（vascular endothelial－cadherin，VE－cadherin）是特异性表达于血管内皮细胞的一类细胞黏附分子，在血管形成过程中必不可少［1］。VE－cadherin与多种恶性肿瘤血管生成相关，但在非小细胞肺癌（non－small cell lung cancer，NSCLC）中的研究尚少。本课题组前期研究［2］显示：VE－cadherin在NSCLC组织中的表达明显高于正常组织，且在癌细胞中大量表达，但其是直接对癌细胞起作用还是对血管内皮细胞起作用尚不清楚。本研究采用RNA干扰技术，沉默肺癌细胞中VE－cadherin的表达，并观察VE－cadherin对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）的影响，为NSCLC的抗血管生成治疗提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 细胞株、主要试剂及仪器 人肺癌细胞株A549由本实验室保存，HUVECs购自中南大学湘雅医学院。DMEM培养基、RPMI－1640培养基和胎牛血清均购自Gibco公司；TRIzol试剂、Primscript RT reagent Kit试剂盒、SYBR Premix Ex Taq荧光定量PCR试剂盒均购于TaKaRa公司；兔抗VE－cadherin购自Abcam公司；MTS试剂购自Promega公司；Matrigel胶购自BD公司；Lipofectamin RNAi MAX Reagent购自Invitrogen公司；AnnexinⅤ－FITC凋亡检测试剂盒购自Sigma公司；细胞周期检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司；人VE－cadherin－双抗夹心ELISA试剂盒购自上海沪尚生物工程有限公司；Western blotting相关试剂购自碧云天公司；RNA干扰序列［3］：正义链，5′－GGAACCAGAUGCACAUUGAUU－3′；反义链，5′－UCAAUGUGCAUCUGGUUCCUU－3′；NC－siRNA 由上海吉玛制药技术有限公司合成；VE－cadherin引物：上游，5′－TTTCCAGCAGCCTTTCTACCA－3′； 下游，5′－GGAAGAACTGGCCCTTGTCA－3′，扩增产物长度为145bp；GAPDH引物：上游，5′－ACCTGACCTGCCGTCTAGAA－3′；下游，5′－TCCACCACCCTGTTGCTGTA－3′，扩增产物长度为227bp，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。……