H2-Calponin 蛋白在4种癌组织的表达及临床意义

2013-08-07涂镇波张永聪单安祺黎业源周素芳

基础医学与临床 2013年2期

李玲，涂镇波，张永聪，陶欢，单安祺，黎业源，周素芳

(广西医科大学基础医学院，广西南宁 530021)

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是广西常见恶性肿瘤，死亡率极高。其病因及发病机理复杂，是研究的热点问题之一。本实验前期利用SEREX 技术从人胚胎干细胞cDNA 文库中筛选出多个肿瘤相关抗原［1］，发现H2-Calponin 与肝癌相关，而目前国内外对H2-Calponin 在肿瘤中的表达鲜有报道［2－3］，其在肝癌组织中的表达分布未见相关文献，本研究利用免疫组织化学和原位RT-PCR探索肝癌相关抗原H2-Calponin 在不同癌组织中的表达，评估其作为肝癌诊断和治疗靶标的潜力。

1 材料与方法

1.1 临床资料

肝癌、肺癌、胃癌和鼻咽癌组织芯片(西安艾丽娜生物科技有限公司)各定购两张分别用于免疫组化和原位RT-PCR 实验，临床资料完整，所有病例术前未行放疗和化疗，术后均经病理证实。

1.2 主要试剂

兔抗人H2-calponin 抗体(Bioworld 公司)，Digox-dUTP(Roch 公司)，Mouse Anti-digox IgG-AP(北京中杉金桥生物技术公司)，H2-Calponin 引物(上海捷瑞生物工程有限公司)。

1.3 免疫组织化学SP 两步法

组织芯片常规脱蜡至水，高温高压进行抗原修复后3% H2O2溶液去除内源性过氧化物酶，山羊血清封闭非特异抗原，加入兔抗人calponin2 一抗(1∶200)4 ℃过夜，加入抗兔二抗(即用型)检测系统，DAB 显色，苏木素复染，镜下观察拍照。用已知阳性的肝癌组织切片做阳性对照，用PBS 代替一抗做阴性对照。