王文文，赵蜀崖

(海南省人民医院内镜室，海南海口570311)

MTHFR基因C667T多态性与胃癌化疗敏感的相关性探讨

王文文，赵蜀崖

(海南省人民医院内镜室，海南海口570311)

目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶基因C667T(rs1801133)多态性与胃癌化疗敏感性的相关性。方法选择我院对5-FU敏感的胃癌患者150例作为实验组，不敏感胃癌患者120例作为对照组，利用PCR技术检测所有样本C667T位点多态性。利用统计学软件SPSS13.0对所有数据进行统计学分析。结果实验组和对照组中均检出CC、CT、TT三种基因型，三种基因型在实验组中的分布频率分别为34.0%、52.0%、14.0%，在对照组中的分布频率分别为45.0%、44.2%、10.8%。等位基因频率C/T在实验组中的分布频率为60%/40%，在对照组中的分布频率为67%/33%。统计学分析结果显示基因型在两组中的分布频率差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论TT基因型有助于5-FU的化疗效果，而CC基因型可能是胃癌患者对5-FU化疗抵抗的重要遗传因素。

胃癌；亚甲基四氢叶酸还原酶基因；C667T多态性；5-氟尿嘧啶

胃癌已经成为世界性的健康难题，每年约有93万新增病例，而同时约有70万病例死亡，其中中国的病例占38%[1]。鉴于人们自我意识及诊断方面的不足，大多数胃癌患者就诊时已经处于癌症晚期，而化疗是可以延缓病程延长患者生存期的重要方式[2]。5-氟尿嘧啶是重要的化疗药物之一，其作用机理是进入体内在亚甲基四氢叶酸的参与下与胸苷合酶形成稳定的复合物，干扰DNA的合成和修复。作为叶酸代谢中的关键酶，亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的活性与5-FU的化疗效果具有相关性[3-4]。目前，影响MTHFR活性的基因多态位点中，C667T是最为常见的位点，该位点对嘧啶类化疗药物的化疗效果的研究已经有相关文献报道，但是结果存在矛盾性[3-7]。本研究收集了本院2008-2011年三年中的胃癌相关病例进行研究，试图揭示MTHFR C667T多态性与胃癌化疗敏感的相关性，为胃癌化疗药物的个性化选择提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取我院2008-2011年三年间对5-FU敏感的150例胃癌患者作为实验组，选取120例不敏感的患者作为对照组。其中实验组患者男性93例，女性57例，年龄42～69岁，平均59.7岁。对照组患者男性82例，女性38例，年龄43～70岁，平均58.5岁。两组患者年龄、体重、癌症转移类型及例数等方面差异均无统计学意义(P＜0.05)。

1.2 研究方法

1.2.1 血样的采集及DNA的提取收集患者血液生化检测剩余血样，利用酚-氯仿的方法提取基因组DNA。检测其质量后置于-20℃保存。

1.2.2 基因型检测利用PCR扩增结合测序的方法检测C667T多态性。50 μl PCR反应体系中含模板DNA 0.2 μg，引物各0.2～0.5 μmol/L，4种dNTP各200 μmol/L，Taq DNA聚合酶(北京天根公司产品)2 U。PCR循环参数为：首先在94℃进行2 min的热变性，随后进行32个循环反应，最后72℃延伸10 min。扩增产物在1.5%的琼脂糖凝胶中电泳检测，送上海生工进行序列测定。

1.3 统计学方法利用SPSS13.0对数据进行统计学分析，基因型频率的比较采取χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

CC、CT、TT三种基因型在实验组中的检出例(率)分别为51例(34.0%)、78例(52.0%)、21例(14.0%)，在对照组中的检出例(率)分别为54例(45.0%)、53例(44.2%)、13例(10.8%)，组间差异具有统计学意义(P＜0.05)，CC基因型不利于5-FU化疗敏感性。实验组和对照组等位基因C/T的分布频率分别为60%/ 40%、67%/33%，组间差异具有统计学意义(χ2=25.63，P＜0.05)。

表1 两组患者基因型检出情况

3 讨论

个体化医疗是未来医学发展的方向，基因SNP多态性与疾病的关系可能为个体化医疗的发展提供理论参考。C667T多态位点是MTHFR基因的SNP位点之一，其CT的突变可导致该蛋白222位氨基酸由丙氨酸转变为缬氨酸，而此处氨基酸的转变将使酶的活性降低[2]。从理论上来说，该酶活性的降低将减少亚甲基四氢叶酸的去路，增加该物质的浓度，从而促进胸苷酸合成酶复合物的形成，进而减少dTTP的合成，使抑癌效果增强。

国内外许多文献对C667T的多态性与5-FU化疗效果的相关性进行了研究[3-7]。Shitara等[7]以日本人群作为研究对象发现TT基因型可以显著提高胃癌患者的化疗效果，有利于提高患者的生存期。而国内也有类似的研究结果，如Huang等[5]研究发现CC基因型患者的化疗效果劣于含有T的基因型，李洁等[3]的研究结果也说明TT基因型的化疗效果优于CT基因型及CC基因型。而在德国人群的研究中发现该SNP位点的多态性与胃癌的化疗效果及预后差异均无统计学意义。因此，关于C667T多态位点与胃癌化疗效果的相关性尚存在争议。

我们对我院2008-2011年三年间的胃癌患者进行分析，研究结果发现，CC、CT、TT三种基因型在实验组中的检出例(率)分别为51例(34.0%)、78例(52.0%)、21例(14.0%)，在对照组中的检出例(率)分别为54例(45.0%)、53例(44.2%)、13例(10.8%)。统计学分析结果显示，组间差异具有统计学意义(P＜0.05)，CC基因型不利于5-FU化疗敏感性。实验组和对照组等位基因C/T的分布频率分别为60%/40%、67%/33%，组间差异具有统计学意义(P＜0.05)，等位基因T可增强5-FU化疗的敏感性。

综上所述，TT基因型有助于5-FU的化疗效果，而CC基因型可能是胃癌患者对5-FU化疗抵抗的重要遗传因素。

[1]Kamang F,Dores GM,Anderson WF.Patterns of cancer incidence, mortality,and prevalence across five continents:defining priorities to reduce cancer disparities in different geographic regions of the world[J].J Clin Oncol,2006,24:2137-2150.

[2]郑磊贞,王志杰.基因多态性与胃癌化疗敏感性的研究进展[J].上海交通大学学报,2011,31(1):89-94.

[3]李洁,季枚,吴昌平,等.亚甲基四氢叶酸还原酶C667T基因多态性与晚期胃癌患者对5-FU化疗敏感相关性[J].江苏医药, 2010,18:2125-2127.

[4]高长明,陆建伟,Takezaki,等.亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与胃癌化疗的敏感新关系研究[J]．中华流行病学杂志,2004,12: 1054-1058.

[5]Huang ZH,Hua D,Li LH.The polymorphisms of TS and MTHFR predict survival of gastric cancer patients treated with fluorouraci-l based adjuvant chem otherapy in Chinese population[J].Cancer Chem other Pharm acol 2009,63(5):911-918.

[6]Frosst P,B lom HJ,Milos R,et al.A candidate genetic risk factor for vascular disease:a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase[J].Nat Genet,1995,10(1):111-113.

[7]Shitara K,Muro K,Ito S,et al.Folate in take along with genetic polymorphism sinmethylenetetrahydrofolate reductase and thymidylate synthase in patients with advanced gastric cancer[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2010,19(5):1311-1319.

Correlation of C667T polymorphism of MTHFR gene and chemotherapy sensitivity of gastric cancer.

WANG Wen-wen,ZHAO Shu-ya.Endoscopy Room,People's Hospital of Hainan Province,Haikou 570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the correlation of C667T polymorphism of MTHFR gene and chemotherapy sensitivity of gastric cancer.MethodsOne hundred and fifty patients with gastric cancer who were sensitive to 5-FU were chosen as the experiment group,and 120 patients with gastric cancer who were not sensitivity to 5-FU were chosen as the control group.The C667T polymorphism and genotype were detected by PCR and sequencing.All the data were analyzed by SPSS13.0.ResultsThree genotypes were detected,which is CC,CT and TT.The frequencies of CC,CT,TT were 34.0%,52.0%,14.0%in the experiment group and 45.0%,44.2%,10.8%in the control group,respectively.The allele frequency of C/T was 60%/40%in the experiment group and 67%/33%in the control group.The difference in the two group was statistically significant(P＜0.05).ConclusionTT genotype is sensitive to the 5-FU,and the CC may be an important factor for chemotherapy resistance.

Gastric cancer;MTHFR gene;Polymorphism of C667T;5-FU

R735.2

A

1003—6350（2013）18—2661—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.18.1108

2013-04-24)

赵蜀崖。E-mail：zsy4444@163.com