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液相色谱法测定洋甘菊中芹菜苷质量浓度研究

2013-07-28陈丽春王菲菲

浙江科技学院学报 2013年1期
关键词:芹菜甲醇色谱

陈丽春,王菲菲

(1.浙江科技学院 生物与化学工程学院,杭州310023;2.浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室,杭州310023)

洋甘菊又称母菊,主要分德国洋甘菊和罗马洋甘菊两种。为菊科甘菊属的花序或全草,一年生或两年生草本植物。主要产于东欧、埃及、北美、比利时、英国等国家,为一种重要的药用植物和香料植物。洋甘菊在欧洲、美国及日本等地早已被广泛利用,成为众所周知的药用植物和香料植物,不少国家加以大面积机械化生产。洋甘菊花朵具有水果香,主要含有挥发油、黄酮类、愈创薁内酯、香豆素类等成分。作为一种引进植物,洋甘菊在中国尚未得到充分的开发及利用[1-3]。大量的实验表明,洋甘菊具有消炎、抑制真菌、解痉等作用[4-6],具有显著的社会经济效益。

芹菜苷为洋甘菊中的一种活性黄酮类物质[7],可作为平滑肌的解痉剂,醛糖还原酶抑制剂和镇静剂。由于对洋甘菊中芹菜苷质量浓度的研究较少,本研究采用高效液相色谱法(HPLC)[8-11]建立了HPLC测定芹菜苷质量浓度的方法,为更好地研究洋甘菊的药用价值和具体成分提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

芹菜苷标准品(批号20110908,上海永恒生物科技有限公司),色谱甲醇(Tedia,United States of America),优级纯乙酸(上海国药集团化学试剂有限公司),其他试剂均为分析纯,洋甘菊(新疆种植,购于杭州滨江艺福堂)。

1.2 仪器与设备

仪器设备:日本岛津高效液相色谱仪(型号规格:LC-20AD,配有SPD-20A可变波长紫外检测器,CTO-20A柱温箱,手动进样阀),超纯水器(Direct-Q®3,MILLIPORE,made in France),KQ-50E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),玻璃砂芯过滤装置(上海兴亚净化材料厂),GZX-9076MBE电热鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司)。

1.3 标准品储备液和供试品的制备

标准品储备液的配置:精密称取5.05mg芹菜苷标准品(质量分数大于99%),用色谱级甲醇溶解配置质量浓度为0.499 95mg/mL芹菜苷标准品储备液,摇匀,用0.22μm膜过滤。根据实验需要,稀释配成所需质量浓度。

供试品的制备:精密称取干燥洋甘菊(过40目筛)126.4g,以70%乙醇,料液比为1∶18,在70℃下回流浸提2.5h,抽滤,再称定质量,70%乙醇补足失重,摇匀,用微孔滤膜(0.22μm)过滤,取续滤液,即得。

1.4 色谱条件

色谱柱:依利特Sinochrom ODS-BP柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为甲醇(A)-1%乙酸水溶液(B),洗脱条件为:V(A)∶V(B)=40∶60;流速:1.0mL/min;柱温:25℃;检测(紫外)波长:333nm;进样量:10μL。

2 结果与分析

2.1 方法学试验

2.1.1 线性关系考察

用移液枪精密量取上述标准品储备液配置成质量浓度分别为0.999 9、1.999 8、3.999 6、4.999 5、24.997 5、39.996 0、49.995 0、99.990 0μg/mL的标准品溶液。在上述色谱条件下检测峰面积,平行测定5次,以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标作图,绘制标准曲线。芹菜苷的线性回归方程为:y=41 616x-3 013.3,R2=0.999 9。结果表明,芹菜苷在0.999 9~99.99μg/mL间线性关系良好(图1)。

图1 芹菜苷标准曲线图Fig.1 Standard curve of apigenin

2.1.2 精密度考察

日内精密度:在上述色谱条件下,将2.999 7μg/mL的标准品溶液在0、2、4、6、8h,进行测定,记录色谱峰面积,连续进样5次,测定峰面积,计算峰面积的RSD%=1.68%。

日间精密度:在上述色谱条件下,将对照品溶液连续3d,每天进样2次,测定峰面积,计算峰面积的RSD%=1.94%。结果表明,此方法的精密度良好。

2.1.3 重现性考察

取洋苷菊提取液1mL置于10mL容量瓶中,用色谱甲醇定容至刻度,平行制备5份溶液,分别取适量溶液于1.5mL进样瓶中,用0.45μm微孔滤膜过滤,在上述色谱条件下进行HPLC分析,分别测定峰面积,计算峰面积的RSD%=2.11%。结果表明,此方法的重复性良好。

2.1.4 稳定性考察

取一份样品溶液,用0.22μm微孔滤膜过滤,取适量溶液于1.5mL进样瓶中,分别在0、2、4、8、12、24h进样,在上述色谱条件下进行HPLC分析,分别进行峰面积的测定,计算峰面积的RSD%=2.28%。结果表明,此方法在室温下24h内的稳定性良好。

2.1.5 加样回收试验

取1mL洋甘菊提取物,稀释10倍定容,加入芹菜苷标准品37.3μg,用5mL的容量瓶定容,即为加标试样。平行制备5组溶液,用0.22μm微孔滤膜过滤,在上述色谱条件下进行HPLC分析,分别测定峰面积,从而计算平均回收率为1.04%,RSD%=1.87%(表1)。

表1 芹菜苷加样回收试验结果Table 1 Sample recovery test of apigenin

3 分析与讨论

3.1 样品的测定与分析

在上述色谱条件下进行HPLC分析,测定峰面积,保留时间在23.748min处为芹菜苷,代入标准曲线计算芹菜苷的质量浓度。测得芹菜苷在洋甘菊中的质量浓度为83.205mg/L(图2,图3)。

图2 洋甘菊提取物的HPLC图谱Fig.2 HPLC chromatogram of chamomile extract

图3 洋甘菊提取物加芹菜苷标准品的HPLC图谱Fig.3 HPLC chromatogram of chamomile extract adding apigenin standard substance

3.2 讨 论

3.2.1 提取溶剂的选择

本研究考察了乙醇-水混合溶剂作为提取溶剂对提取效果的影响。结果发现,当乙醇与水体积比为70∶30时,提取效果较好,芹菜苷质量浓度较高。因此,选用了乙醇与水体积比为70∶30。

3.2.2 检测波长的选择

用UV-5500PC型紫外/可见分光光度计进行全波长扫描发现,芹菜苷在267nm和333nm处有特征吸收峰,其在333nm处吸收峰达最大。所以,本次实验选取的检测波长为333nm。

3.2.3 流动相比例的选择

查阅相关文献,经过比较选择了甲醇-乙酸为流动相,考察了不同比例甲醇-乙酸对芹菜苷和其他组分的分离情况。发现甲醇与1%乙酸的体积比为40∶60时,芹菜苷能与其他组分完全分离。

4 结 语

试验结果表明,该HPLC方法稳定,测得结果准确,重复性好,能用于测定洋甘菊中芹菜苷的质量浓度。对所测得数据进行分析可得,洋甘菊中芹菜苷的质量浓度较低,资料显示芹菜中有着较高的芹菜苷的质量浓度。另外在样品的提取时,通过对原料和产品的检测发现,大孔树脂能起到初步富集洋甘菊中芹菜苷的作用,且AB-8型大孔树脂效果最好。

[1]杨彦松,潘浪胜.洋甘菊中黄酮类成分的分离与结构确定[J].应用化工,2008,37(6):697-698.

[2]郑汉臣,全山丛,张虹,等.值得重视的归化药用和香料植物:母菊(洋甘菊)[J].中草药,1996,27(9):568-571.

[3]沙红,廖康.药用植物洋甘菊的组织培养研究[J].新疆农业大学学报,2004,27(4):16-18.

[4]周伯庭,李新中.母菊的化学成分研究[J].湖南中医学院学报,2001,21(1):27-28.

[5]Heidari M R,Dadollahi Z,Mehrabani M,et al.Study of antiseizure effects ofmatricariarecutitaextract in mice[J].Annals of the New York Academy of Science,2009,1171:300-304.

[6]Avallone R,Zanoli P,Kleinsohnitz M,et al.Pharmacological profile of apigenin,a flavonoid isolated from matricaria chamomill[J].Biochemical Pharmacology,2000,59(11):1387-1394.

[7]贾佳,谢静莉,许学书.芹菜苷体外活性的研究[J].食品科学,2008,29(12):99-101.

[8]陈静萍,尹梦晨,陈亮,等.湖南芹菜中芹菜苷和3’-甲氧基芹菜苷含量的测定[J].湖南农业科学,2009,25(9):33-35,45.

[9]徐静,郭长江,韦京豫,等.蔬菜中类黄酮物质的高效液相色谱测定法[J].营养学报,2005,27(4):276-279.

[10]王克勤,罗军武,陈静萍,等.高效液相色谱法测定芹菜中芹菜素含量[J].食品与机械,2009,25(2):74-77.

[11]谢程,李琳,段书涛,等.HPLC测定海风藤药材中海风藤酮的含量[J].天然产物研究与开发,2010,22(6):1077-1080.

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