邓毛子，包永芬，梁莹，宁志丰

（1.湖北科技学院基础医学院医学微生物学教研室，湖北咸宁 437100；2.湖北科技学院基础医学院病原学实验室，湖北咸宁 437100；3.湖北科技学院基础医学实验示范中心，湖北咸宁 437100）

油茶籽油为野山茶果提炼而成的食用油，别名山茶油、茶油。它主要含有油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸，其脂肪酸含量、比例与橄榄油极为相似，素有“东方橄榄油”的称号，甚至有些营养成分的指标还要高于橄榄油[1]。除了作为食用油使用的这一用途外，其还在医药、化妆品、化工等行业具有广阔的市场前景[1-10]。在生物学、医学实验教学中，显微镜是一种最基本的教学仪器，在观察细菌、原虫等微小的生物标本时，需要用到油镜，通常使用香柏油作为其观察媒介，由于香柏油的价格较高，不易购买，且在使用的过程中因清洗剂的挥发而对环境造成污染，对使用者，尤其是对长期使用者的健康会造成不利影响，因此人们对现有的油镜组成和使用进行改进，武连生、孙明山、赵春娥、唐开红、魏纳新等在油镜观察介质及清洗剂方面做出了一定的改进[11-15]。茶油在物理性状方面与香柏油较为相近，其价格相对较低，且易于购买，因此对目前市场上常见的茶油进行了折光率的测定，并就标本在茶油介质中的镜下观察效果及其清洗剂等方面与香柏油进行了对比研究，以期找到另一种更为经济安全的能有效替代香柏油的油镜观察介质，进一步拓展茶油的实际用途。

1 材料与方法

1.1 材料

擦镜纸；95%酒精；介质油A：香柏油；介质油B：金龙鱼茶油；介质油C：金浩茶油；介质油D：高氏茶油；标本片；洁净载玻片；竹签；二甲苯；清洗剂A：立白洗洁精；清洗剂B：雕牌全效加浓洗洁精；清洗剂C：白猫洗洁精；清洗剂D：威猛先生厨房重油污净；清洗剂E：绿伞油烟净。

1.2 主要设备及仪器

2W/2WAJ阿贝折光仪：上海明兹精密仪器有限公司；奥林巴斯显微成像系统（XPTW-50）；Eppendorf单道可调量程移液器。

1.3 检测方法

1.3.1 介质油A及几种茶油的折光率测定

按2W/2WAJ阿贝折光仪使用说明书进行。

1.3.2 几种样本在分别用介质油A、介质油B作为观察介质的油镜下的观察效果对比观察

按奥林巴斯显微成像系统（XPTW-50）使用说明书进行。

1.3.3 介质油A、几种茶油室温下凝固干结时间测定

将介质油A以及不同品牌茶油各取1滴（50 μL）分别滴于不同的洁净载玻片上，置于25℃室温下，每天以竹签划动及擦镜纸擦拭的方式检测其是否变稠凝固，并记录其凝固干结时间。

1.3.4 不同清洗剂对凝固干结茶油的清洗效果观察

1.3.4.1 不同品牌茶油玻片凝固干结物的制取

取不同品牌茶油各取1滴（50 μL）分别滴于不同的洁净载玻片上，置于25℃室温下使其自然凝结。

1.3.4.2 不同清洗剂对凝固干结茶油的清洗效果观察

向不同品牌的茶油在玻片上形成的凝固干结物中分别加入 50 μL 的二甲苯、清洗剂 A（原液，1 ∶2，1 ∶4，1∶8，1∶16倍蒸馏水稀释液）、清洗剂 B（原液，1∶2，1 ∶4，1∶8，1∶16倍蒸馏水稀释液）、清洗剂 C（原液，1∶2，1 ∶4，1∶8，1∶16倍蒸馏水稀释液）、清洗剂 D（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸馏水稀释液）、清洗剂 E（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸馏水稀释液），观察实验现象，并每隔10 s用擦镜纸擦拭，观察其清洗效果。

2 结果

2.1 介质油A及几种茶油的折光率测定结果

介质油A及几种茶油的折光率测定结果，结果见表1。

2.2 几种样本在分别用介质油A、介质油B作为观察介质的油镜下的观察效果对比观察

几种样本在分别用介质油A、介质油B作为观察介质的油镜下的观察效果对比观察，结果见图1～图4。

表1 介质油A及几种茶油的折光率Table 1 The refractive index of median oil A and several kinds of camellia oil

2.3 介质油A、几种常见茶油室温下凝固干结时间测定结果

图1 大肠杆菌革兰染色标本片镜下观（1×1 000）Fig.1 The observation results of Escherichia.coli gram stain specimen under oil immersion lens

图2 金黄色葡萄球菌革兰染色标本片镜下观（1×1 000）Fig.2 The observation results of Staphylococcus aureus gram stain specimen under oil immersion lens

图3 钩体镀银染色标本片镜下观（1×1 000）Fig.3 The observation results of Leptospira silvered stain specimen under oil immersion lens

介质油A在室温下第2天液体变稠，擦拭时黏度大，易将擦镜纸黏附在玻片上，用擦镜纸不能完全清除，第3天完全凝固干结。3种品牌茶油保持易清除的液体状态的时间均超过10 d，介质油B和介质油D为12d，介质油C为11d；介质油B和介质油D自第13天起，明显变稠，用擦镜纸擦拭时黏度大，易将擦镜纸黏附在玻片上，用擦镜纸不能有效从玻片上清除，介质油C自第12天起明显变稠，用擦镜纸擦拭时黏度大，易将擦镜纸黏附在玻片上，用擦镜纸不能有效从玻片上清除。上述三种品牌茶油均于第28天完全凝固干结。

图4 青霉标本片镜下观（1×1 000）Fig.4 The observation results of Blue mould specimen under oil immersion lens

2.4 不同清洗剂对凝固干结茶油的清洗效果观察结果

二甲苯作用10 s后，即能将凝固干结物完全溶解，用擦镜纸能有效将其自玻片上清除。用清洗剂A（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸馏水稀释液）、清洗剂 B（原液，1 ∶2，1 ∶4，1 ∶8，1 ∶16 倍蒸馏水稀释液）、清洗剂 C（原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16倍蒸馏水稀释液）这三种清洗剂作用10 s后，干结物表面均出现白色乳化物，但用擦镜纸不能有效将其自玻片上完全清除，仍有干结物存留（稀释度越大，残留越多），用擦镜纸擦拭时玻片上黏度较大，延长作用时间至1 min，仍不能完全清除。用清洗剂 D（原液，1∶2，1 ∶4，1 ∶8，1 ∶16 倍蒸馏水稀释液）、清洗剂 E（原液，1 ∶2，1∶4，1∶8，1 ∶16倍蒸馏水稀释液）清洗10 s后，其原液能使茶油干结物乳化，可有效将玻片上的干结物完全清除，用擦镜纸擦拭，与未变稠的茶油一样，无明显黏度；其1∶2，1∶4稀释液需作用至30 s后才能有效将玻片上的干结物完全清除，用擦镜纸擦拭，与未变稠的茶油一样，无明显黏度；其1∶8，1∶16稀释液，延长作用时间至1 min，仍有少许干结物残留，不能完全清除。

3 结论与讨论

茶油作为一种营养丰富的植物油，在中国很早就用作食用，有着丰富的营养价值。与介质油A同为油脂类，其物理学性状较为相似，魏纳新等发现常用色拉油可以作为介质油A的替代品[15]，与常用色拉油相似的茶油理应可以有效代替介质油A作为油镜观察媒介。本研究的结果表明，几种不同品牌的茶油的折光率（介质油B、介质油D为1.467 0，介质油C为1.466 5）与介质油A（1.510 0）近似，标本片在介质油B介质下的镜下观察效果见图1～图4，其视野亮度较之介质油A下的视野亮度稍暗，但不影响标本片的有效观察，其物像的分辨率与介质油A相当，对标本片中常见色彩的展现效果与介质油A无明显差别（见图1～图4），因此其可有效代替介质油A作为油镜观察介质。同时常规的油镜清洗剂为二甲苯，有的实验室也使用酒精乙醚混合液（3∶2）作为清洗剂，二甲苯具有挥发性，易污染空气，尤其是大量学生同时进行油镜操作时，对实验室的污染更加严重，其被吸入后不仅对人的神经系统有损伤，还会对造血系统造成损害，此外乙醚和酒精的挥发也会影响神经系统。使用茶油作为油镜观察介质，从本研究可以看出，与介质油A比较，其在室温下保持较易清除的液体状态的时间较介质油A更长，即使使用二甲苯进行清洗，也可减少二甲苯使用频次，同时它也可用不易挥发的油污净等日用油污清洗剂进行有效清洗，从而更为安全，但由于油污净等清洗剂与二甲苯比较起来，不易挥发，因此在使用其作为油镜清洗剂时，需用擦镜纸多次擦拭镜头，减少清洗剂的少量残留，以免残留的清洗剂影响观察效果。此外介质油A价格较贵（目前一般约为0.3元/mL～0.4元/mL），而常见食用茶油目前市场价格一般约为0.05元/mL～0.1元/mL，因此茶油成本更为低廉，且较介质油A更易购置。

综上所述，食用茶油价格低廉、易于购买，其折光率及标本片的镜下观察效果与介质油A无明显差别，且可用多种危害性较小且易于购置和保存的清洗剂进行清洗，对实验室环境污染较少，可有效替代介质油A作为油镜的观察介质。本研究进一步拓展了茶油的实际用途。

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