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草鱼Smad4基因的克隆、生物信息学分析及反义真核载体的构建

2013-07-12吕池波郁二蒙王广军余德光李志斐王海英龚望宝

华南农业大学学报 2013年4期

吕池波,郁二蒙,谢 骏,王广军,余德光,李志斐,王海英,龚望宝

(1 中国水产科学研究院 珠江水产研究所,农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,广东 广州510380;2 上海海洋大学 水产与生命学院,上海201306)

在Smads 蛋白家族中已发现9 个成员[1],根据结构和功能的差异可分为通用型、受体激活型和抑制型Smads.通用型Smads 的主要功能是与受体激活型Smads 结合形成异源寡聚体,将信号转至细胞核内,调节基因表达[2],目前仅发现Smad4 这1 种.Smad4 是TGF-β/smads 信号转导通路中的中心转导分子,它通过形成异源寡聚体,将信号转导至细胞核内,从而调控靶基因的转录并诱导下游基因的表达[3],因此它的表达情况与生长、发育等生命过程密切相关.在鱼类研究中,只有斑马鱼Danio rerio、鲤Cyprinus carpio、虹鳟Oncorhynchus mykiss、金鱼Carassius auratus 等少数物种的Smad4 基因被克隆.在鲤体内发现Smad4 基因有不同的组织表达模型,暗示着Smad4 通过改变组织表达水平来调控TGF-β 信号通路[4].在斑马鱼胚胎发育研究中发现Smad4 的时空分布广泛且表达量大,而与之相关的Smad3 基因呈现一种空间限制性表达模式[5].将金鱼的Smad4结构与Smad2、Smad3 及Smad7 比较分析发现,Smad4 编码的氨基酸序列中间连接区域少了42 个氨基酸,这可能就是它在LT-2 细胞中失活的原因[6].目前,有关草鱼Smad4 基因的研究鲜见报道.

研究基因功能常用的方法有基因转导技术、反义技术、基因敲除和敲入、基因诱捕技术等,其中反义技术利用DNA 或RNA 分子通过Watson-Crick 碱基配对原则与目的基因的mRNA 互补结合,通过各种机制使其降解或抑制其编码蛋白的翻……

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