甘惠中，史冠男，戴 夫，彭 琼

安徽医科大学第三附属医院消化内科，安徽合肥230061

上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transtions，EMT)是上皮细胞来源肿瘤发生局部浸润和远处转移的一个重要途径［1］。细胞遗传学及临床研究发现胃癌中EMT相关基因存在高表达，提示EMT参与胃癌的侵袭与转移［2-3］。已有大量研究显示，内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)可诱导包括肝癌细胞、乳腺癌细胞等多种肿瘤细胞发生EMT［4］;但胃癌细胞中未见研究报道。本研究旨在观察TM诱导的ERS能否介导胃癌SGC-7901细胞发生EMT，以期为寻找抑制胃癌侵袭、转移新靶点提供依据。

1 材料与方法

1.1 细胞系 胃癌细胞SGC-7901由安徽医科大学第三附属医院消化内科保存。

1.2 主要仪器和试剂 本研究采用美国Bio-Rad公司电泳仪、电泳槽和转移电泳槽;美国Thermo公司酶标仪;日本三洋公司二氧化碳孵箱;北京半导体设备厂JTT-7A超净工作台;Eppendorf公司台式高速冷冻离心机;RPMI 1640培养基购自美国Hyclone公司;胎牛血清购自浙江天杭生物科技有限公司;葡萄糖调节蛋白 78(glucose-regulated protein78，GRP78)、E-钙黏蛋白(E-cadherin，E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cadherin，N-cad)一抗购自 Bioworld公司;甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)一抗及二抗购自北京中杉金桥生物技术公司。TM购自美国Sigma公司，使用时用二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)配制，再用培养液配成10 μg/ml浓度备用。0.25%胰酶、PBS由本实验室自行配置。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养及分组:复苏SGC-7901细胞，按1×105个/孔的密度接种于6孔板中，每孔2 ml。使用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液，置37℃、5%CO2培养箱内培养。待细胞进入指数生长期后，将其分为TM组、阴性对照组与DMSO组，每组2个复孔。TM组加入10 μg/ml的TM;阴性对照组仅加含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液;DMSO组加入与TM组相同体积的DMSO，置37℃、5%CO2培养箱内培养规定时间后收取细胞用于检测。……