Abl相互作用蛋白1过表达对胃癌细胞系AGS体外凋亡及迁移的影响
2013-06-07崔梅花郁卫东侯晓琳雷晓燕
崔梅花,傅 怡,郁卫东,侯晓琳,雷晓燕
1.航天中心医院北京大学航天临床医学院消化科,北京100049;2.北京大学人民医院临床分子生物学研究所
Abl相互作用蛋白1(ABI1)基因位于人类10p 11.2染色体,其编码的ABI1蛋白属于Abl相互作用蛋白家族成员,参与细胞骨架重建,调控细胞的正常生物学行为[1]。近年来ABI1与恶性肿瘤发生、发展的关系得到不断关注,研究显示ABI1参与BCR-Abl诱导性白血病及某些实体肿瘤(如乳腺癌、黑色素瘤等)细胞的增殖、凋亡、黏附或迁移[2-4],其表达缺如或降低与人类前列腺癌及某些类型白血病的发生、发展密切相关[5-6]。前期研究发现ABI1在人胃癌组织及细胞中表达缺如或下调[7],我们进一步以胃癌细胞系AGS为研究模型,检测了ABI1过表达对胃癌细胞体外迁移能力及凋亡等生物学行为的影响,从而探讨ABI1在胃癌发生、发展中的作用及可能机制。
1 材料与方法
1.1 材料 人胃癌细胞系AGS由北京市肿瘤防治研究所提供,DMEM高糖培养基购自美国GIBCO公司,胎牛血清购自德国Hyclone公司,血清白蛋白(BSA)购自美国PIERCE公司,LipofectaminTM2000购自美国Invitrogen公司,嘌呤霉素购自美国Amresco公司,Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物发展有限公司,Transwell小室购自美国Corning公司,MatrigelTM基底膜胶购自美国BD公司,鼠干细胞病毒(MSCV)-绿色荧光蛋白(GFP)质粒、MSCV-GFP-ABI1质粒由美国德克萨斯州理工大学医学院戴宗汉博士惠赠。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养及转染:AGS细胞用高糖DMEM培养基+10%灭活胎牛血清常规培养,细胞传代采用0.25%胰蛋白酶消化。AGS细胞转染前24 h接种适量细胞(每孔约3×105个)至6孔板中,加2 ml 10%灭活胎牛血清无双抗培养基培养24 h。……
