刘福元，张云峰，王海萍，刘华，杨旭民

（1.新疆农垦科学院畜牧兽医研究所，新疆石河子832000；2.新疆新农乳业有限责任公司，新疆阿克苏843015；3.新疆兵团农四师畜牧兽医站，新疆伊宁835000）

奶牛子宫内膜炎病料细菌的分离及药敏试验

刘福元1，张云峰1，王海萍2，刘华2，杨旭民3

（1.新疆农垦科学院畜牧兽医研究所，新疆石河子832000；2.新疆新农乳业有限责任公司，新疆阿克苏843015；3.新疆兵团农四师畜牧兽医站，新疆伊宁835000）

选阿克苏地区某牛场患临床型子宫内膜炎奶牛6头，采子宫分泌物进行细菌的分离、纯化、染色镜检，并自制药敏纸片，对分离的细菌进行药物敏感试验。结果显示：分离的主要细菌为链球菌、葡萄球菌和大肠杆菌。分离的3种菌对盐酸林可霉素和诺氟沙星均高度敏感，可作为该牛场子宫内膜炎治疗药物的选择参考。

奶牛子宫内膜炎；细菌分离；药敏试验

奶牛子宫内膜炎是牛场的一种常见病，主要引起奶牛不孕，延长产间距，从而导致养殖经济效益下降。很多研究表明，引起子宫内膜炎的主要原因是微生物的感染，包括细菌、真菌、支原体、病毒等。细菌的感染在奶牛子宫内膜炎的发生中起着最重要的作用[1]。导致奶牛子宫内膜炎的细菌复杂多样，在生产中由于长期大量使用同类抗生素，使致病菌产生耐药性，增加了治疗的难度。笔者根据基层奶牛场现有的诊断条件，对患有子宫内膜炎的奶牛宫内分泌物进行了细菌的分离培养,并自制了药敏纸片，对分离的主要细菌进行药敏试验，旨在为奶牛场治疗该病筛选高敏药物，达到较好的治疗效果。

1 材料及方法

1.1 药敏纸片的制作

试验所使用的药物有8种，分别是青霉素G、链霉素、盐酸林可霉素、诺氟沙星、土霉素、卡那霉素、庆大霉素、磺胺嘧啶钠。按照杭州天和微生物试剂有限公司产品的常用抗生素纸片含药量,进行药物浓度计算与稀释。

制备好的干燥药敏纸片分装在小瓶内密封，放干燥器中低温保存备用，有效期3-6个月。

1.2 病料采集与细菌分离

阿克苏地区某牛场，经临床确诊患子宫内膜炎的奶牛6头，采集其子宫分泌物。先用温水冲洗患牛阴户,再用高锰酸钾溶液清洗消毒，然后按直肠把握法通过灭菌输精管先给子宫注入10 mL灭菌生理盐水,再抽取子宫分泌物1~2 mL，及时送实验室用于细菌分离。

将子宫内膜炎病料用划线法分别接种于普通琼脂、血平板、麦康凯琼脂、SS琼脂培养基上，37℃培养16～18 h。观察各种培养基上菌落形态，同时对不同形态的单个菌落进行革兰氏染色镜检，观察细菌形态。同时对病料直接涂片染色，观察细菌形态，与培养物染色对比，找出优势菌。最后分别挑取单个菌落接种到普通营养肉汤中培养，以备药敏试验使用。

1.3 药敏试验

将每种细菌培养物用生理盐水稀释，使其浑浊度相当于0.5麦氏比浊管。用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液均匀致密涂布于M-H培养基表面。用无菌镊子取不同药敏片贴到培养基表面。直径为90 mm的平皿贴纸片7张，两纸片中心距离不少于24 mm，纸片与平皿边不少于15 mm，药敏纸片一旦接触平板即不再移动。记录每种药敏片的名称。4℃作用2 h后置37℃恒温箱内培养24 h后取出，测量抑菌圈直径。

每种细菌做4个重复。观察纸片周围有无抑菌圈，测量其直径的大小，计算其平均值，并按照葛兆宏主编《动物微生物》药敏试验判定标准判定最后试验结果[2]。

2 结果

2.1 细菌的分离培养

采集的病料进行细菌分离培养，通过分离细菌的菌落形态和革兰氏染色特征（表1），初步分析认为，本奶牛场子宫内膜炎病料中的主要细菌有3种，分别是链球菌、葡萄球菌和大肠杆菌。

2.2 细菌药敏试验结果分析

分离的三种主要菌重复进行药敏试验测量的每种药物抑菌圈的直径，按照标准判定结果为（表1）：链球菌对盐酸林可霉素和诺氟沙星高度敏感，对土霉素、卡那霉素、庆大霉素及磺胺嘧啶钠敏感，对青霉素G、链霉素不敏感。葡萄球菌对盐酸林可霉素、诺氟沙星和磺胺嘧啶钠高度敏感，对卡那霉素、链霉素和庆大霉素敏感，对青霉素G和土霉素不敏感。大肠杆菌对盐酸林可霉素、诺氟沙星及卡那霉素高度敏感，对土霉素、庆大霉素及磺胺嘧啶钠敏感，对青霉素G、链霉素不敏感。最终可以选择盐酸林可霉素和诺氟沙星两种药物应用于患子宫内膜炎的奶牛治疗。

表1 三种细菌药敏试验结果 mm

3 讨论

本试验对奶牛子宫内膜炎病料分离到细菌菌落形态观察和涂片染色结果，认为该牛场奶牛子宫内膜炎病料中的主要细菌有链球菌、葡萄球菌及大肠杆菌，与徐耀基（1998）[3]、孔祥峰（2005）[4]、杨克礼(2008)[5]、陈星（2010）[6]等报道的结果相一致，与李有文等[1]对新疆阿克苏地区某牛场的20头子宫内膜炎奶牛分离出的大肠杆菌(占53.1%)和科氏葡萄球菌(占38.2%)以及干燥棒状杆菌、亚利桑那沙门菌、鲁氏不动杆菌等不完全一致，这可能是由于不同牛场主要致病菌群不同，也可能是本试验采集的患牛的头数较少的原因。

药敏试验结果表明，盐酸林可霉素和诺氟沙星对三种分离的致病菌均高度敏感，可作为该牛场治疗奶牛子宫内膜炎的首选药物。青霉素G、链霉素、土霉素、卡那霉素、庆大霉素、磺胺嘧啶钠等药物的抑菌效果相对较差，可能与其长期使用这些药物而产生耐药性有关。李有文等[1]药敏试验认为庆大霉素和妥布霉素对所分离的病原菌普遍有较好的抑制作用，这可能是由于不同牛场使用的抗生素不同及所产生的耐药性不同，细菌种类不同，试验所用的药物也不完全相同所致。这进一步说明各牛场子宫内膜炎中的细菌种类及其对药物的敏感性都不尽相同，也提示我们在药物治疗类似病例时，不能一味地套用别的牛场的试验结果或治疗经验。

本试验所采集的病料，均来自从澳大利亚引入的荷斯坦奶牛的后代，在澳大利亚奶牛基本都实行放牧，进入国内实行圈养，使得奶牛产前普遍存在运动不足，营养物质过剩的现象，导致母体过肥，胎儿过大，难产率加大，人工助产，常常引起产道损伤及感染，加上环境不洁，患子宫内膜炎的几率加大。李正国等调查显示48.05%的子宫内膜炎患病与人工助产有关[7]，因此合理配制围产前期日粮，加强产房及运动场的环境卫生，正确助产，实行严密的产后生殖监护，是降低奶牛子宫内膜炎的关键。

[1]李有文，刘孝杰，陶大勇.奶牛子宫内膜炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J].畜牧与兽医,2011,43(1):16-19.

[2]葛兆宏编.动物微生物[M].北京:中国农业出版社，2001,155-167.

[3]徐耀基.奶牛子宫内膜炎病原菌药敏试验[J].中国奶牛,1998，(4):42-43.

[4]孔祥峰,刘志刚.南京某奶牛场子宫内膜炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J].中国兽医杂志,2005,4(8): 21-22.

[5]杨克礼,徐涤平.奶牛子宫内膜炎病原菌药敏试验[J].甘肃畜牧兽医,2008,203(6):2-3.

[6]陈星,胡松华.奶牛子宫内膜炎病原菌的分离鉴定及药敏试验[J].中国兽医杂志,2010,46(1):43-44.

[7]李正国,罗瑞卿.新疆石河子市及周边地区奶牛子宫内膜炎的发病规律调查[J].中国奶牛,2009,(6): 35-38.

Isolation and Drug Sensitivity Test of Pathogenic Bacteria Causing Cow Endometritis

LIU Fu-yuan1，ZHANG Yun-feng1，WANG Hai-ping2，LIU Hua2，YANG Xu-min3
（1.Husbandry and Veterinary Institute,Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science,Shihezi 832000，China;2.Akzo Sunon Dairy Products Co.,Ltd，Akzo 843015,China; 3.Husbandry and Veterinary Station,No.4 farming Division in Xinjiang Production and Construction Corps, Yining 835000,China）

6 cows suffered from endometritis in Aksu were selected and the pathogens were isolated and examined with smear Gram stain from the uterine secretions．A drug sensitive test was performed for pathogenic bacteria with self-made susceptibility paper.The results indicated that the main species of isolated bacteria were Streptococcus,Staphylococcus and E.coli.The drug susceptibility test results showed that Lincomycin hydrochloride and norfloxacin were highly sensitive against the isolated three pathogens and could be used as the preferred drugs for the treatment of cow endometritis in the cattle farm．This study was aimed to take advantage of the existing condition in cattle farm,and screen out high-sensitivity drugs for the treatment of cow endometritis,and promote the use of technology.

cow endometritis;isolation of bacteria;drug sensitivitive test

S858.23

A

1003－6377（2013）01－0065-03

2012-11-11

新疆兵团科技攻关项目（2010GG57）；农四师科技发展专项基金项目（KJZX200811）

刘福元（1968-），男，陕西长安人，研究员，主要从事动物营养与饲料科学及奶牛养殖方面的研究工作。