肌酐酶法与碱性苦味酸法测定尿中肌酐含量的对比分析
2013-06-02王凯彭珊茁郑晓梅魏明至
王凯 彭珊茁 郑晓梅 魏明至
肌酐被用于尿液中毒物含量检测的校正。在一般情况下饮食、饮水量和利尿剂对肌酐的排出率没有太大影响,每日的变化很小。用肌酐量来表示被测物浓度水平与接触浓度有较好的相关性。目前,尿肌酐测定的行业标准为碱性苦味酸分光光度测定法[1](WS/T 97-1996)。该方法为手工法,与全自动化的肌酐酶法相比较,操作繁琐且效率较低。作者通过试验对比,肌酐酶法可以替代碱性苦味酸法用于尿肌酐含量的测定。
1 资料与方法
1.1 碱性苦味酸法
1.1.1 仪器 UV2100紫外-可见光分光光度计(北京莱伯泰科)。
1.1.2 试剂 约15 g/L饱和苦味酸溶液(临用前过滤);100 g/L氢氧化钠溶液;碱性饱和苦味酸溶液(氢氧化钠溶液+饱和苦味酸上清液=1+10,临用前配制);0.1 mol/L盐酸(GR级);肌酐贮备液(经110℃干燥2 h的肌酐100 mg,以盐酸溶液稀释至100 ml,配成浓度1.0 mg/ml肌酐贮备液);肌酐标准液(肌酐贮备液用水稀释成0.1 mg/ml的标准溶液);肌酐标准曲线(分别取标准液 0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 ml,加水至3 ml,再向各管加入2 ml碱性苦味酸溶液,混匀,于室温下反应 20 ~30 min,加水 5 ml,混匀,配制成浓度为 0、1、2、3、4、5 μg/ml标准应用液);试验用水全部为超纯水。
1.1.3 原理 肌酐与过量苦味酸在碱性条件下反应生成橙红色苦味酸肌酐。在波长490nm处比色定量。
1.1.4 方法 取25 μl尿样置于10 ml比色管中,加水至3 ml,空白直接加3 ml水。向各管加入2 ml碱性苦味酸溶液,混匀,于室温下反应20~30 min,加水5 ml,混匀。在波长490 nm下测吸光度,在0.5 h内比色完毕。
1.2 肌酐酶法
1.2.1 仪器 TBA-120FR全自动生化分析仪(日本东芝)。
1.2.2 试剂 肌酐试剂盒(北京九强生物技术有限公司,批号08-0222);0.85%生理盐水(0.85 g氯化钠溶于100 ml水中);试验用水为蒸馏水。……
