朱虹，陈珵，凌峰，邵晨，余敏，邵世和

(江苏大学基础医学与医学技术学院，江苏 镇江 212013)

CagL(cytotoxin-associated gene L)蛋白是幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)Ⅳ型分泌系统(typeⅣsecretion system，TFSS)菌毛结构的表面蛋白，桥联TFSS与靶细胞的特异性黏附。CagL蛋白分子上的RGD基序被宿主细胞上的整合素α5β1受体所识别，可激活整合素依赖性的细胞信号转导通路，介导CagA蛋白在胞内定位，启动及稳固CagA的磷酸化，进而导致IL-8水平升高［1］。本实验以CagL蛋白为研究对象，原核表达并制备CagL融合蛋白，以其为抗原免疫BALB/c小鼠;运用细胞融合技术将免疫的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后获得杂交瘤细胞，通过有限稀释法筛选得到3株能够稳定分泌抗CagL蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)的杂交瘤细胞株，并对其性质进行鉴定。

1 材料与方法

1.1 菌株、质粒和细胞

大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)，江苏大学基础医学与医学技术学院实验室保存;原核表达载体pET-28a(+)-cagL，本课题组自行制备;H.pylori NCTC11637标准菌株、H.pylori 26695标准菌株，均为中国疾病预防控制中心张建中教授馈赠;H.pylori临床分离株M13，第三军医大学郭军教授馈赠;H.pylori临床分离株来自山东省威海市市立医院送检的两份胃黏膜标本，编号HP-1和HP-2。小鼠骨髓瘤细胞SP2/0购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。

1.2 实验动物

SPF级雌性BALB/c小鼠购自扬州大学比较医学中心，免疫接种小鼠为5～7周龄，腹腔积液制备时小鼠8周龄以上。

1.3 主要试剂

IPTG购自TaKaRa公司;Ni2+-NTA亲和层析柱购自Qiagen公司;预染蛋白分子质量标准、ECL化学发光试剂盒购自碧云天生物技术有限公司;RPMI-1640培养基、HAT选择培养基、HT选择培养基及胎牛血清购……