严妍，杨茂，Wolf-dieter Rausch，王喜军

(1.黑龙江中医药大学药学院，黑龙江 哈尔滨 150040;2.哈尔滨医科大学附属第四医院心内科，黑龙江 哈尔滨 150001;3.Department of Biomedical Sciences，Veterinary Medical University，Vienna，Austria，A-1210)

乌头碱(aconitine)来自于乌头属植物中所含的二萜类生物碱成分，几个世纪以来，乌头属植物作为祛风除湿止痛功效的药物，始终被中国和日本等国家的不同人群使用。乌头碱的治疗作用和毒性作用，发作时均反应迅速，可在几分钟内发生，且发生时与刺激电位的钠离子通道有关，这同样也是乌头碱产生神经毒素和心脏毒素的致毒机理所在［1－3］。乌头碱作为心脏毒素目前已被广泛和全面地研究，但对其神经毒性方面的研究甚少，仅仅集中在临床病例报道和症状描述方面。本实验从胎鼠原代中脑神经元细胞培养的层面研究乌头碱的神经毒性作用，通过神经元标志物信息的检测和提取来评价乌头碱对中脑神经元细胞的药理毒理作用，以更好地了解和预防乌头碱及其衍生物产生的神经毒性作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物、仪器和试刘

怀孕14 d的OF1/SPF小鼠，由奥地利Himburg医科大学动物中心提供。

层流式工作台(Holten Laminair，丹麦);NAPCO5410孵育箱(德国);倒置显微镜(Nikon);SMZ-1B解剖显微镜(Nikon)。

乌头碱(Sigma公司);ABC免疫组化试剂盒(Vector laboratories，USA);DMEM培养基、胎牛血清和二氨基联苯胺(DAB)试剂盒(德国 Sigma-Aldrich公司);二甲基亚砜(DMSO)(德国Merck公司);杜尔贝科磷酸盐缓冲盐水(DPBS)、胰蛋白酶及胰蛋白酶抑制剂(Invitrogen公司)。

1.2 方法

1.2.1 中脑原代细胞培养 对OF1/SPF孕鼠的饲养及实验，均在欧洲联盟理事会(86/609/EU)的指导方针下进行。处死怀孕14 d的小鼠，乙醇消……