李云，钱军，陈芹，姚冬明，王翠竹，柴海彦，杨静，林江，马吉春，陈星星，马玉娟

(江苏大学附属人民医院1.血液科，2.中心实验室，江苏 镇江212002)

慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia，CML)是一种起源于造血干细胞的恶性骨髓增殖性疾病。根据疾病发展的过程，分为慢性期、加速期以及急变期。CML 的发病与BCR/ABL易位引起的酪氨酸激酶异常激活密切相关［1]。PDLIM4 基因(PDZ and LIMdomain 4 gene)，又称RIL(reversion-induced LIM)基因，是定位于染色体5q31.1 的抑癌基因［2]，可抑制肿瘤细胞增殖、促进细胞凋亡［3-5]。近年来研究发现PDLIM4 基因启动子甲基化与CML 疾病进展和伊马替尼耐药相关，且是CML 患者的一个不良预后因素［1]。我们应用实时定量PCR(RQ-PCR)及实时定量甲基化特异性PCR(RQ-MSP)技术检测了中国CML 患者PDLIM4 基因转录本及启动子甲基化水平，并探讨其临床意义。

1 对象与方法

1.1 病例

59例CML 患者均来自于我院门诊和住院部，均按文献［6]方法进行诊断和分期，均通过染色体和(或)融合基因检测证实。检测PDLIM4 表达和启动子甲基化状态的对照组均为特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者，病例数分别为21例和24例。

其中，用于检测PDLIM4 基因表达的36例标本包括33例慢性期及3例急变期患者。共有60例样本用于检测PDLIM4 基因启动子甲基化状态，其中59例初发(慢性期44例，加速期6例，急变期9例)，1例为经治疗随访患者的标本。

1.2 主要试剂与仪器

淋巴细胞分离液(Ficoll)购自上海试剂二厂;Trizol购自美国Invitrogen 公司;Evagreen 染料购自Biotium 公司;MMLV 及TaqDNA 聚合酶购自美国Fermentas 公司;基因组DNA 提取试剂盒为美国Gentra公司产品;pMD®19T 克隆载体为TaKaRa 公司产品;凝胶回收试剂盒及质粒DNA 小量试剂盒购自Axygen公司;DNA 甲基化修饰试剂盒EpiTech Bisulfite Kits购自德国QIAGEN 公司;引物均由生工生物(上海)有限公司合成。……