李 黎，张少容，熊辉强，高树峰，兰 宁

（南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科 330006）

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是一类Zn2＋依赖的蛋白水解酶，参与细胞外基质的降解与组织重塑，可降解基底膜从而促进喉癌细胞的侵袭和转移。伊洛马司他是羟肟家族中一种有效的基质金属蛋白酶抑制剂（matrix metallo-proteinase inhibitors，MMPI），其与存在于所有蛋白酶中的Zn原子的活性中心相结合，从而抑制MMP的活性，进一步抑制喉癌的侵袭与转移［1-2］。本实验通过伊洛马司他、化疗药物卡培他滨两药单独和联合处理喉癌hep-2细胞，观察其对hep-2细胞的影响，并探讨伊洛马司他在抗肿瘤过程中的具体作用机制，为喉癌的联合化疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 （1）试剂：RPMI1640培养基购自北京索莱宝科技有限公司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司；胰酶，北京索莱宝科技有限公司；二甲基亚砜（DMSO）购自北京索莱宝科技有限公司；MTT购自Sigma公司；RT-PCR试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司；PI／annexinV凋亡盒购自南京凯基生物科技发展有限公司；卡培他滨，大连美伦医药科技发展有限公司；伊洛马司他购自美国Santa Cruz公司。（2）细胞株：人喉癌细胞株hep-2，购于南京凯基生物科技发展有限公司。将细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液培养，其中青霉素、链霉素各100μ／mL，长满后用0.25%胰酶消化传代。（3）引物：根据prime 5.0软件设计引物，由金斯瑞生物科技有限公司合成。MMP-9引物（362bp）的上游序列为5′-CGG CAC CTC TAT GGT CCT C-3′，下游序列为 5′-CAC TTG TCG GCG ATA AGG AA-3′。内参引物β-actin（434bp）上游序列为5′-CGG GAA ATC GTG CGT GAC-3′，下游序列为5′-TGG AAG GTG GAC AGC GAG G-3′。

1.2 甲基偶氮唑盐（MTT）法检测hep-2细胞的抑制率 取处于对数生长期的hep-2细胞，制成单细胞悬液，调整细胞数为7.5×104／mL接种于96孔细胞板，每孔100μL，待细胞贴壁后加药。……