付晓达，高美华

(基础研究)

人环指蛋白11真核表达载体的构建及表达

付晓达，高美华

目的 构建含有标签蛋白的人环指蛋白11(ring finger protein 11，RNF11)的真核表达载体，并观测其在293T细胞中的表达。 方法 使用MEGA5.0等生物学软件构建人RNF11的分子进化树;应用RT-PCR从4种人胃癌细胞系中检测到该基因的表达，并将其克隆到pEASY-Blunt载体中，酶切测序鉴定正确后，再将其连接到真核表达载体pCMV-HA中，酶切鉴定正确后转染293T细胞，Western-blotting测其表达。结论重组的携带有RNF11的真核表达载体酶切鉴定后显示载体及片段的大小正确，将该真核表达载体转染293T细胞后使用Western-blotting检测到了融合蛋白的表达。结果携带有标签蛋白的人RNF11基因的真核表达载体pCMV-HA-RNF11克隆及表达成功，为进一步研究其与其它蛋白质的相互作用奠定了基础。

环指蛋白;泛素连接酶E3:真核表达载体;胃癌

0 引 言

细胞在其生长发育的过程中受到了一系列生长因子的调控。正常的生长因子的调控对于机体来说是至关重要的。肿瘤等恶性疾病的发生发展与异常的生长因子表达、修饰密切相关［1］。泛素化修饰是机体蛋白翻译后加工修饰的一个重要途径，被泛素标记的蛋白质会被迅速的降解［2］。目前认为，蛋白降解过程的异常与肿瘤等恶性疾病密切相关。RNF11属于泛素连接酶E3家族成员。目前有研究表明，这一含有154个氨基酸的蛋白可能与生长因子的信号转导、泛素化修饰以及转录调节密切相关［3］。先前的研究认为，该蛋白能够直接活化转化生长因子 β(transforming growth factor-β，TGF-β)信号转导通路，从而可能在肿瘤生长过程中发挥了重要的作用［3］。……