杨娴娴 Jodie T Hatfield Susan J Hinze 穆雄铮 Peter J Anderson Barry C Powell

实时荧光定量PCR（RT-qPCR）作为检测基因 表达谱的高通量、高精度的方法，在生物学研究中已得到广泛应用。采用稳定的内参基因对反应进行标准化，可以增加该方法的敏感度、可重复性和动态范围，理想的内参基因在所研究的组织、细胞和实验条件下均恒定表达。管家基因是维持细胞最低限度功能必不可少的基因，在所有类型细胞中都表达，是广泛应用的内参基因，如β-actin（肌动蛋白）、GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）、B2M（微球蛋白）及18S RNA等[1]。然而，很多研究表明，管家基因在不同组织、细胞以及不同条件下，表达量并非永远恒定，甚至差别很大，至今尚未发现在所有条件下均恒定表达的管家基因[2-4]。因此，对特定基因表达研究中候选管家基因的表达稳定性进行评价，筛选出最为稳定的管家基因作为内参，对于保证研究结果的真实可靠至关重要。目前已有不少相关的统计分析软件，如 geNorm、Norm Finder、Bestkeeper等用于内参基因的筛选[2，5-6]。

目前，在颅骨成骨与颅缝闭合过程中基因表达的研究方面，RT-qPCR分析并未根据所研究组织细胞的种类或不同的实验条件而选择合适的内参基因，多数仍简单采用β-actin或GAPDH作为内参。

本实验选择与颅骨成骨、颅缝闭合相关的常用的3组实验标本，分别为：Fgfr2cC342Y/+小鼠颅缝组织、颅缝早闭患者体外培养颅缝原代细胞和体外培养的小鼠Kusa 4b 10成骨细胞株，以常用的候选管家基因作为研究对象，利用geNorm软件对RT-qPCR结果进行分析，以筛选出在不同组织细胞中表达最为稳定的管家基因作为内参。……