王明新朱艳红

（1.内蒙古呼伦贝尔市人民医院，内蒙古 海拉尔 021000；2.通辽市药品检验所，内蒙古 通辽 028000）

朱格伦乌日-6是由莲子、石榴、肉桂、豆蔻、荜茇、红花六味药组成的复方蒙药制剂。功能主治为使反常之精华归位，调经。用于由赫依所致的白带过多，月经淋漓，腰肾部疼痛，不消化引起的胃痛等病。红花为该方中主要成份之一，具有活血通经，散瘀止痛功效。对本方的临床疗效有重要作用，以红花中主要有效成分羟基红花黄色素A为定量监控指标可有效地控制产品的质量。本文采用HPLC法测定其中羟基红花黄色素A的含量，方法简单、准确、重现性好。可作为质量控制的方法。

1 仪器、试剂和药品

岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10Avp检测器、CTO-2A柱温箱、SIL-HTA自动进样器、CLASS-VP工作站组成。甲醇、乙腈为色谱纯，水为高纯水，磷酸为分析纯。羟基红花黄色素A（批号：111637-200503购自中国药品生物制品检定所。朱格伦乌日-6批号:20061208 20090606 20090612由呼伦贝尔市蒙医院制剂室提供。

2 方法和结果

2.1 色谱条件：色谱柱：phenomenexC18柱(250mm×4。6mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26：2：72）,检测波长为 403nm,流速为 1.0mL·min-1，进样量 10μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液制备:精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加50%甲醇制成每1mL含羟基红花黄色素A 0.04275mg·mL-1。

2.2.2 供试品溶液：取朱格伦乌日-6，研细，取粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，超声（功率90W，频率59kHz）处理40min，放冷，过0.45μm微孔滤膜取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液：按照朱格伦乌日-6的制备工艺制备不含红花的阴性样品，并按“2.2.2”项下方法制成阴性样品溶液。

2.3 系统适用性试验：取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液，在上述色谱条件下进样分析，理论塔板数按羟基红花黄色素A峰计算不低于3000。样品中其他成分对羟基红花黄色素A的测定无干扰。结果见图1。

图1 羟基红花黄色素A对照品（A）、样品（B）、缺红花阴性样品（C）高效液相色谱图

2.4 线性关系考察：精密吸取配制好的对照品溶液2、6、8、10、15、20、30μL分别进样。以峰面积A为纵坐标，以对照品进样量X（μg）为横坐标，绘制标准曲线。羟基红花黄色素A进样量在0.0855～1.2825μg范围内线性关系良好。回归方程为Y=3045787.8X-71952.8 r=0.999。

2.5 精密度试验：取取“2.2.1”项下的对照品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，羟基红花黄色素A色谱峰面积的RSD（n=6）为0.42%。

2.6 重复性试验：取样品粉末6份，按“2.2.2”项下方法操作，平行制备供试品溶液6份，在上述色谱条件下进行分析测定。结果羟基红花黄色素A含量的平均值（n=6）为1.09mg·g-1，RSD为0.9%。

2.7 稳定性试验：取同一供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，12，24h 按上述色谱条件测定。测得羟基红花黄色素A峰面积的RSD（n=6）1.6%。结果表明供试品溶液室温旋转24h内稳定。

2.8 回收率试验：精密称取已知含量的样品约1g，共6份，分别精密加入羟基红花黄色素A对照品溶液适量，按“2.2.2”项下方法操作，测定含量，并计算回收率。结果见表1。羟基红花黄色素A平均回收率（n=9）为100.1%。

表1 朱格伦乌日-6中羟基红花黄色素A的回收率

2.9 样品测定：取朱格伦乌日-6，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，记录色谱峰面积，计算含量。结果见表2。

表2 朱格伦乌日-6中羟基红花黄色素A的含量测定结果（n=3）

3 讨 论

3.1 试验对提取方法、提取时间进行了考察，结果采用50%甲醇超声提取40min进行供试品溶液的制备，该法提取效能高，干扰物质少，操作简单、快捷。

3.2 配制一定浓度的羟基红花黄色素A对照品溶液，分别在200～500nm波长内进行全扫描，羟基红花黄色素A在403nm处有较强的紫外吸收。实验选择403nm进行测定。

3.3 本文建立了一种准确可靠、专属性强、简单快捷的定量方法，通过对黄芩苷的含量测定，达到控制该制剂质量的目的。