张西云，范玉霞，胡国元，李生庆，李秀萍

（青海省畜牧兽医科学院，青海 西宁810016）

青海省海北州祁连县默勒镇2006～2008年绵羊发生持续死亡，死亡数达6 554只，发病前，该地区每年3～4月用羊三联苗免疫羊群，但仍然有大量羊只发生死亡，经我室确诊为肠毒血症后，采用产气荚膜梭菌标准菌株C60－2（D型），采用优化的培养基配方使该菌的产毒能力提高到3万MLD／mL，制成羊肠毒血症菌苗后2009年、2010年在青海祁连默勒地区免疫绵羊105 000只，结果免疫羊群均未发生本病。为该地区羊肠毒血症的发生和流行提供了有效的菌苗，很大程度上减少了牧民的经济损失。

1 材料

标准的产气荚膜梭菌C60－2菌株（来自中国兽医药品检查所）；VF培养基（本室自制）；健康家兔1.5～2kg购自乐都种兔场；16～20g小鼠购自地方病研究所；甲醛；氢氧化铝胶（本室自制）。

2 方法

2.1 基础液制备 将产气荚膜梭菌标准菌株C60－2（D型）接种到加生肝的V.F培养基中，37℃培养24h，用16～20g小鼠测定毒力。

将培养24h的种子培养物接种至1万mL的大瓶中，37℃培养24h。

2.2 最小致死量测定 吸取大瓶24h培养物1mL，加含2.5g／L胰酶的1%碳酸钠溶液1mL，37℃活化45min，5 000r／min离心15min，上清用生理盐水10倍递减稀释，每一稀释度静脉注射小鼠2只（0.2mL／只）。观察记录结果。

2.3 脱毒 按菌液量的1%加入甲醛后密封，37℃～38℃杀菌脱毒14d，每d充分振荡2次。将脱毒后的样品接种至加生肝的厌气肝汤、普通肉汤、普通斜面上［1］，37℃培养7d观察记录。

2.4 安全检验 将脱毒后的样品经胰酶活化离心，上清静脉注射体重16～20g小鼠2只，每只0.4 mL，观察记录结果。结果：基础液最小致死量为3万MLD／mL；无菌检验，加生肝的厌气肝汤、普通肉汤及普通斜面培养基上均无菌生长；……