钱宁，孙灿林，姜琳，赵国军，蒋小芹，于鸿

(1.姜堰市人民医院麻醉科，江苏 姜堰225500;2.泰州市人民医院麻醉科，江苏泰州225300;3.泰州市人民医院病理科，江苏泰州225300)

吗啡作为一种临床常用的阿片类药物，广泛应用于终末期癌症疼痛及各种中重度非癌症疼痛治疗，其镇痛作用及机制已被深入研究。近年来的研究表明，吗啡可促进肿瘤细胞的凋亡并抑制肿瘤细胞的增殖，但具体机制并不十分明了。本研究通过观察不同浓度吗啡对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞生存素(survivin)和livin表达的影响，探讨其促进细胞凋亡及抑制细胞增殖的机制。

1 材料与方法

1.1 主要材料

人乳腺癌细胞株MCF-7(中国科学院上海细胞生物研究所)，DMEM、胎牛血清、RT-PCR试剂盒(Gibco公司，美国)，二甲基亚砜(DMSO)、四氮噻唑盐(MTT)、Annexin V-FITC试剂盒(Sigma公司，美国)，兔抗人survivin多克隆抗体、兔抗人livin多克隆抗体(Santa Cruz公司，美国)，ABC试剂盒(Vector公司，美国)，吗啡(批号:110120－2，东北制药集团公司沈阳第一制药厂)，PCR引物由上海英骏生物技术有限公司合成。

1.2 细胞培养及分组

人乳腺癌细胞株MCF-7培养于含10%胎牛血清、100 μg/ml链霉素、100 U/ml青霉素的 DMEM 培养液，37℃，5%CO2培养箱培养。取对数生长期细胞重悬，以1×103个/ml接种在6孔板内，培养24 h，采用随机数字表法，将MCF-7细胞随机分为3组:对照组，不作任何处理;0.1μmol/L吗啡组，加入终浓度0.1 μmol/L 吗啡;1.0 μmol/L 吗啡组，加入终浓度1.0 μmol/L 吗啡。每组18 孔。

1.3 RT-PCR法检测生存素和livin mRNA表达

于吗啡孵育24 h时，每组各取18孔细胞，用Trizol抽提总RNA，逆转录成cDNA，等量cDNA依照本实验室常规方法［1］进行PCR。PCR引物序列:内参照GAPDH上游5'-ACCACAGTCCATGCCATGCCATCAC-3';下游 5'-CCACCACCCTGTTGCTGTAG-3'，预计扩增片段长度为450 bp。生存素上游5'-GGACCACCGCATCTCTACAT-3';下游 5'-GCACTTTCTTCGCAGTTTCC-3'，预计扩增片段长度为338 bp。……